本文關鍵詞：表皮調(diào)節(jié)素、纖聯(lián)蛋白與去唾液酸糖蛋白受體介導HBV進入肝細胞機理初步研究　出處：《西北農(nóng)林科技大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染是世界范圍的嚴重公共衛(wèi)生問題之一,但是目前沒有特效防治方法,存在的關鍵問題在于HBV基因組較小,易發(fā)生突變,限制了靶向抗病毒藥物的發(fā)展。最近的研究表明,抑制宿主細胞中某些蛋白的功能可以阻斷病毒感染。與病毒基因組相比,人類基因組序列中可能包括更多與病毒復制有關的基因。應用DNA微陣列(芯片)技術系統(tǒng)分析宿主基因表達,是一種從宿主細胞中發(fā)現(xiàn)潛在抗病毒靶標的有效方法。本室通過應用基因芯片技術,獲得了HBV感染相關的3個關鍵分子,即表皮調(diào)節(jié)素(Epiregulin,簡稱EREG)、纖聯(lián)蛋白(Fibronectin,簡稱FN)和去唾液酸糖蛋白受體(Asialoglycoprotein recertor,簡稱ASGPR)。本實驗旨在前期工作的基礎上,研究上述3個關鍵分子與乙型肝炎病毒表面抗原(surface HBV antigens,HBsAg)的相互作用及其在HBV感染肝細胞中的作用,以解釋HBV吸附并進入細胞的機理,為基于病毒與宿主相互作用的新型抗HBV藥物的開發(fā)提供理論依據(jù)。 研究獲得了以下主要結(jié)果: 1.首次發(fā)現(xiàn)EREG和HBsAg存在相互作用,通過構(gòu)建EREG的真核表達載體并將其轉(zhuǎn)染肝細胞發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染EREG有助于HBsAg對細胞的吸附,因此推測它可以充當胞外可溶性輔助受體,幫助HBV與肝細胞結(jié)合,從而有利于HBsAg和膜上受體相互作用以使病毒進入肝細胞。 2.采用免疫共沉淀技術,對HBsAg、FN和ASGPR之間的相互作用進行了驗證,并將FN和ASGPR分段克隆表達,通過GST-pull down技術篩選了FN、ASGPR與HBsAg相互作用的功能域片段。結(jié)果顯示FN主要通過其中央細胞結(jié)合域的N端及Ⅱ型肝素結(jié)合域(HeparinⅡ)與HBsAg相互作用,通過120kD細胞結(jié)合域與ASGPR相互作用。ASGPR主要通過其糖蛋白識別結(jié)構(gòu)域(carbohydrate recognition domain,CRD)與FN的相互作用。但采用GST-pull down技術未能篩出ASGPR與HBsAg的互作區(qū)域,可能是原核表達的ASGPR功能域片段缺少修飾或?qū)嶒炛兴玫南嗷プ饔脳l件不合適。 綜上所述,本研究證實了EREG、FN、ASGPR和HBsAg之間的相互作用,篩選了FN、ASGPR和HBsAg相互作用的功能域,并研究了EREG和HBsAg之間的相互作用及其與HBV進入肝細胞的關系,發(fā)現(xiàn)EREG在HBV和肝細胞結(jié)合的過程中起著胞外輔助性受體的作用。感染
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【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R373

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1 王峰;表皮調(diào)節(jié)素、纖聯(lián)蛋白與去唾液酸糖蛋白受體介導HBV進入肝細胞機理初步研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2007年

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本文編號：1352824