本文關鍵詞：脫氧核酶阻斷period1基因表達的體內(nèi)外研究　出處：《四川大學》2005年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：藥物成癮是長期濫用藥物造成的,已成為全球關心的醫(yī)學和社會問題,對藥物的精神依賴至今尚無理想的治療方法,本研究立足于近日基因period1(per1)和藥物成癮的關系,采用脫氧核酶阻斷per1基因的表達,深入探討per1基因?qū)λ幬锍砂a影響作用,進而尋求解決藥物成癮的基因療法。 針對period1(per1)RNA組分模板區(qū)設計合成10—23型脫氧核酶(deoxyribozyme)DRz164、DRz256,構(gòu)建pcDNA3.1(+)-per1_(164:256)體外轉(zhuǎn)錄質(zhì)粒,T7/SP6體外轉(zhuǎn)錄后,轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和DRz164或DRz256在一定的條件下行體外切割反應,用地高辛核酸檢測試劑盒檢測脫氧核酶對per1mRNA組分的體外切割效率。脂質(zhì)體介導法,pcDNA3—per1和DRz分別導入NIH3T3細胞,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應和流式細胞術檢測NIH3T3細胞per1表達。結(jié)果顯示DRz164和DRz256可以特異性地切割per1mRNA組分,反應2h切割效率分別為63%和50.5%。pcDNA3—per1和DRz共轉(zhuǎn)染NIH3T3后,per1基因表達下降,Per1蛋白生成減少。 預先小鼠腦室注射DRz164,建立嗎啡成癮(慢性依賴)動物模型,通過條件位置偏愛實驗觀察DRz164對嗎啡獎賞效應的影響。最后一次嗎啡(鹽水)注射后每隔4h提取腦組織蛋白,western blot檢測Per1蛋白變化,觀察DRz164對Per1蛋白的影響。最后一次嗎啡(鹽水)注射后
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【學位授予單位】：四川大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R346

【參考文獻】

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本文編號：1351501