本文關(guān)鍵詞：整合素β1對人表皮干細(xì)胞增殖與分化的影響　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 表皮干細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 分化 整合素β_1 基因轉(zhuǎn)染 RNA干擾

【摘要】：表皮干細(xì)胞(keratinocyte stem cell,KSC)位于表皮基底層,具有強(qiáng)大的增殖潛能,可分化形成全層表皮,并具有產(chǎn)生皮膚附件的作用,是潛在的多能干細(xì)胞。由于表皮干細(xì)胞數(shù)量少,而且體外培養(yǎng)很容易分化,所以對培養(yǎng)KSC的生物學(xué)特性進(jìn)行深入研究具有重要的意義。探究如何在體外培養(yǎng)獲得足夠數(shù)量的KSC用于研究及移植、如何在體內(nèi)外誘導(dǎo)KSC定向分化是KSC研究的又一重要課題,解決這些問題的關(guān)鍵在于研究KSC增殖與分化的調(diào)控機(jī)制。 本室先期已對不同來源皮膚中的KSC的定位分布進(jìn)行了研究,對KSC進(jìn)行了初步的分離培養(yǎng)。本研究主要探討分離純化人KSC的方法,觀察KSC在體外培養(yǎng)條件下的生長及分化特性。針對目的基因整合素β1(integrin β1)構(gòu)建siRNA表達(dá)質(zhì)粒并鑒定,探討下調(diào)KSC中整合素β1的表達(dá)對KSC增殖與分化的影響。 將人表皮細(xì)胞接種在Ⅳ型膠原包被的培養(yǎng)瓶中粘附10min,取粘附的類KSC以低密度接種于滋養(yǎng)層上,培養(yǎng)14d后挑選KSC克隆分散培養(yǎng),觀察其克隆再形成率,通過免疫細(xì)胞熒光染色法檢測培養(yǎng)KSC中intergin β1及involucrin的表達(dá)水平,分析其細(xì)胞周期。將一個(gè)KSC克隆的所有子代細(xì)胞消化后接種,連續(xù)傳代,培養(yǎng)14d后計(jì)算克隆形成率(CFE),觀察KSC子代細(xì)胞的總體分化情況。 針對目的基因integrin β1選擇了兩個(gè)RNAi作用靶點(diǎn),構(gòu)建到pSilencer3.1/H1-Hygro載體上,通過酶切及測序鑒定重組陽性質(zhì)粒。將低密度接種的KSC克隆挑選出來分散后接種,待細(xì)胞長至60%左右匯合時(shí)轉(zhuǎn)染,用不同比例脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑Dotap介導(dǎo)轉(zhuǎn)染不同劑量報(bào)告基因EGFP,優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。重組陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人KSC,通過定量western blot、半定量RT-PCR檢測對目的基因的抑制效率,篩選出最有效的RNAi作用靶點(diǎn),將其重組質(zhì)粒命名為siIntegrin β1。 重組質(zhì)粒siImegrin β1轉(zhuǎn)染人KSC48～72h后,提取細(xì)胞總蛋白及總RNA,通過定量western blot、半定量RT-PCR檢測對目的基因的抑制效率;并對RNAi后KSC行細(xì)胞周期分析。挑選RNAi后48～72h的KSC克隆分散后接種于滋養(yǎng)層上,培養(yǎng)14d
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R329.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉嘉祺;林峰;李孟全;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及生物學(xué)特性[J];牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年03期

2 王亞東;李愛民;彭陽;白楊;燕群;鄧麗娟;劉思德;;多株消化道腫瘤細(xì)胞在硝酸纖維素膜界面生長的初步研究[J];現(xiàn)代消化及介入診療;2011年03期

3 譚琦;黃政德;王立鳳;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離和培養(yǎng)方法的研究[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2011年07期

4 董麗華;傅士龍;韓素萍;;人上皮性卵巢癌組織中腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年07期

5 陳先才;陳海濱;蔡博治;林常敏;;膠原酶消化法分離、培養(yǎng)大鼠觸須毛乳頭的方法[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2011年05期

6 王璐;葛少華;王效英;楊丕山;;FHL2蛋白在人牙周膜細(xì)胞體外礦化過程中的表達(dá)[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

7 高小青;杜杰;鄧?yán)?郭侃;楊朝鮮;王特為;;新生大鼠海馬神經(jīng)元的改良培養(yǎng)[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年03期

8 高元妹;張平;夏e，

本文編號：1348876