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  本文關(guān)鍵詞：禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒p30-gp90串聯(lián)表達蛋白及其免疫原性　出處：《微生物學報》2014年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：【目的】研究禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(Reticuloendotheliosis Virus,REV)群特異性抗原P30與囊膜糖蛋白gp90體外共表達蛋白的免疫原性,為研發(fā)新型REV抗體診斷試劑盒提供基礎(chǔ)�！痉椒ā扛鶕�(jù)REV脾臟壞死病毒(spleen necrosis virus,SNV)株的前病毒基因組cDNA序列,設(shè)計合成2對引物,以pPB101質(zhì)粒為模板,分別擴增REV p30基因和gp90基因片段。將PCR產(chǎn)物依次克隆入表達載體pET-28a(+)中,通過酶切鑒定和測序分析,篩選陽性重組克隆pET-p30-gp90。重組菌經(jīng)異丙基硫代D-半乳糖苷(IPTG)誘導后,通過SDS-PAGE電泳分析表達情況,Western blot檢測表達蛋白與特異性血清之間的反應性。制備表達蛋白的抗血清,以該抗血清與REV感染的雞胚成纖維細胞(CEF)進行間接免疫熒光實驗(IFA),驗證表達蛋白的免疫原性�！窘Y(jié)果】經(jīng)SDS-PAGE電泳后能觀察到預期大小的表達條帶,Western blot結(jié)果顯示,重組蛋白能與REV抗血清反應。將表達產(chǎn)物純化后免疫Balb/c小鼠,制備p30-gp90抗血清,該抗血清與REV感染CEF在IFA中呈現(xiàn)特異性熒光反應�！窘Y(jié)論】體外串聯(lián)表達REV p30-gp90蛋白,表達蛋白具有良好的免疫原性。
[Abstract]:[Objective] to study the Avian Reticuloendotheliosis Virus (Reticuloendotheliosis, Virus, REV) immunogenic protein co expression of group specific antigen P30 and glycoprotein gp90 in vitro, provide the basis for the development of new diagnostic kit for REV antibody. [Methods] 2 pairs of primers were designed and synthesized according to the cDNA sequence of REV spleen necrosis virus (SNV) strain. PPB101 REV was used as template to amplify REV P30 gene and gp90 gene fragment respectively. The PCR products were cloned into the expression vector pET-28a (+) in turn, and the positive recombinant clone pET-p30-gp90 was screened by enzyme digestion and sequencing. The recombinant bacteria were induced by isopropyl thiosulfate D- galactoside (IPTG). The expression was analyzed by SDS-PAGE electrophoresis, and Western blot was used to detect the reactivity between the expressed protein and the specific serum. The antiserum of the expressed protein was prepared, and the immunogenicity of the expressed protein was verified by indirect immunofluorescence assay (IFA) with REV infected chicken embryo fibroblast (CEF). [results] the expected size of the bands could be observed after SDS-PAGE electrophoresis, and the results of Western blot showed that the recombinant protein could react with the antiserum of REV. The expression products were purified and immunized with Balb/c mice to prepare p30-gp90 antiserum. The antiserum and REV infected CEF showed a specific fluorescence reaction in IFA. [Conclusion] REV p30-gp90 protein is expressed in series in series, and the expression protein has good immunogenicity.
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院;廣東大華農(nóng)動物保健品股份有限公司;中國農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究所;
【基金】：重大動物疫病新型疫苗的關(guān)鍵技術(shù)研究與產(chǎn)業(yè)化(2011A090200117)~~
【分類號】：R373
【正文快照】： 禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥(Reticuloendotheliosis,RE)是由逆轉(zhuǎn)錄病毒科的禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)引起的雞、鴨、火雞和其他禽類的一種以淋巴-網(wǎng)狀細胞增生為特征的腫瘤性病理綜合征[1-2]。REV已經(jīng)呈世界性分布,該病在澳大利亞、匈牙利、英國、德國等國均有報道,我國于1988

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1345766