發(fā)布時間：2017-12-28 07:29

  本文關鍵詞：基于卡介苗Prime結(jié)核桿菌DNA疫苗Boost免疫策略及其效應研究　出處：《東南大學》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 結(jié)核桿菌 抗原85A IL-21 GM-CSF DNA疫苗 Prime-Boost免疫策略

【摘要】： 結(jié)核病是由結(jié)核桿菌引起的慢性傳染病,其中肺結(jié)核病最為常見。據(jù)WHO官方網(wǎng)站數(shù)據(jù)顯示,全世界約有1/3的人口感染過結(jié)核桿菌,每年患結(jié)核病的人數(shù)約新增800萬人,約有200萬人死于結(jié)核病。而我國衛(wèi)生部公布2005年全國法定報告?zhèn)魅静∫咔轱@示:無論是報告發(fā)病數(shù)還是死亡數(shù),肺結(jié)核均列第一位。HIV加速了結(jié)核桿菌的傳播,而不規(guī)范的用藥使大量結(jié)核耐藥菌株出現(xiàn),造成許多結(jié)核病人用現(xiàn)有抗結(jié)核藥難以治愈。再加上傳統(tǒng)疫苗卡介苗(Bacille calmette guerin,BCG)免疫效果總體下降,對其保護效率(0-80%)也存在爭議,因此急需研制新型疫苗以及對已研制的疫苗制訂新的免疫策略增強抗結(jié)核病效應。 國內(nèi)外學者在結(jié)核DNA疫苗方面進行了一系列的研究,其中Ag85A作為靶抗原取得了一定的效果,但單獨以其作為DNA疫苗的靶抗原,仍需要一定的改進。 我們實驗室在前期的研究中成功構(gòu)建了結(jié)核桿菌Ag85A和細胞因子GM-CSF共表達DNA疫苗,通過動物實驗證實共表達DNA疫苗免疫組小鼠的CTL活性明顯增強、特異性淋巴細胞明顯增殖,NK細胞殺傷活性與對照組相比有一定提高。在此實驗基礎上,利用雙啟動子真核表達質(zhì)粒pRSC,分別設計與構(gòu)建新型結(jié)核桿菌DNA疫苗,為研究新型有效的結(jié)核桿菌DNA疫苗提供新的策略。本實驗分為兩個部分: 一、基于結(jié)核桿菌Ag85A的共表達DNA疫苗的設計、構(gòu)建與鑒定目的:利用雙啟動子真核表達質(zhì)粒pRSC,分別構(gòu)建結(jié)核桿菌Ag85A與細胞因子IL21共表達疫苗pRSC-mIL21-Ag85A以及結(jié)核桿菌Ag85A與細胞因子GM-CSF共表達疫苗pRSC-mGMCSF-Ag85A ,為研究新型結(jié)核桿菌DNA疫苗提供新的策略。方法: (1)pRSC-mIL21-Ag85A的構(gòu)建,先用PCR方法從本室保存的重組質(zhì)粒pcDNA3.1-mIL21中擴增出小鼠IL21基因序列并插入到質(zhì)粒pRSC上成為pRSC-IL21,再用PCR方法從pIRES-Ag85A重組質(zhì)粒中擴增出Ag85A基因,構(gòu)建于pRSC-IL21重組質(zhì)粒上,成為共表達DNA疫苗pRSC-mIL21-Ag85A;(2)pRSC-mGMCSF-Ag85A的構(gòu)建,用PCR方法從pIRES-Ag85A重組質(zhì)粒中擴增出Ag85A基因后構(gòu)建于本室保存的重組質(zhì)粒pRSC-mGMCSF上,得到共表達DNA疫苗pRSC-mGMCSF-Ag85A。結(jié)果:經(jīng)酶切、基因測序及RT-PCR證實,重組DNA疫苗構(gòu)建正確并能成功表達目的基因。結(jié)論:基于Ag85A與IL21、Ag85A與GM-CSF的共表達DNA疫苗的構(gòu)建成功,為比較研究不同載體共表達DNA疫苗(pRSC-mGMCSF -Ag85A、pIRES-Ag85A-mGMCSF)以及基于不同細胞因子的共表達DNA疫苗(pRSC-mIL21-Ag85A、pRSC-mGMCSF-Ag85A)的抗結(jié)核免疫效應及篩選高效結(jié)核桿菌DNA疫苗奠定了基礎。 二、基于BCG Prime結(jié)核桿菌Ag85A/GM-CSF共表達DNA疫苗Boost免疫策略及其效應
[Abstract]:Tuberculosis is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis, of which tuberculosis is the most common. According to the official website data of WHO, about 1/3 of the world's population is infected with Mycobacterium tuberculosis. The number of TB patients is increased by 8 million per year, and about 2 million people die of tuberculosis. And the Ministry of health of China announced the 2005 national legal report of infectious diseases show: whether the number of reports or the number of deaths, tuberculosis is the first. HIV accelerates the spread of TB bacilli, and the nonstandard drug use of a large number of drug-resistant strains of tuberculosis, causing many tuberculosis patients to use the existing anti tuberculosis drugs can not be cured. In addition, the immune effect of the traditional vaccine Bacille Calmette Guerin (BCG) is decreasing, and its protective efficiency (0-80%) is also controversial. Therefore, it is urgent to develop new vaccines and formulate new immunization strategies for the developed vaccines, so as to enhance the anti TB effect.
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：1345144