本文關(guān)鍵詞：內(nèi)毒素耐受的THP-1細(xì)胞系髓系細(xì)胞觸發(fā)受體1表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《華中科技大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的應(yīng)用LPS分兩次刺激人單核細(xì)胞白血病THP-1細(xì)胞系,誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)毒素耐受。了解單核細(xì)胞系統(tǒng)在產(chǎn)生內(nèi)毒素耐受時(shí),TREM-1在核酸和蛋白質(zhì)水平的表達(dá),NF-κB在蛋白質(zhì)水平的表達(dá)及TREM-1與NF-κB兩者的關(guān)系。 方法用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)人THP-1細(xì)胞,將細(xì)胞隨機(jī)分為4組(A、B、C、D),A為空白對(duì)照,B、C、D為實(shí)驗(yàn)組,再將B、C、D分為B1,B2,B3;C1,C2,C3和D1,D2,D3共九個(gè)小組。A組用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)THP-1細(xì)胞24 h后,再換新無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)6 h, A、B、C、D三組分別用含濃度0、0、10、100 ng/mL LPS的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)THP-1細(xì)胞24 h,然后依次用含0 ng/mL LPS、10 ng/mL LPS、100 ng/mL LPS和500 ng/mL LPS培養(yǎng)A組、B1,C1,D1小組、B2,C2,D2小組及B3,C3,D3小組各6 h。提取RNA及總蛋白,以RT-PCR檢測(cè)TREM-1 mRNA水平的表達(dá),以Western Blot檢測(cè)NF-Κb p65與TREM-1蛋白水平的表達(dá),以ELISA檢測(cè)培養(yǎng)液上清中TNF-α和IL-10的水平。 結(jié)果A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3組TREM-1 mRNA與β-actin光密度比值依次為:0.5641±0.0031、0.6112±0.0012、0.6860±0.0041、0.8360±0.0034、0.4687±0.0031、0.5862±0.0038、0.5958±0.0032、0.4387±0.0038、0.5762±0.0044、0.5894±0.0041。A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3組TREM-1蛋白的灰度值與GAPDH灰度比值依次為:0.4698±0.0096、0.5962±0.0044、0.6541±0.0043、0.7617±0.0050、0.4700±0.0042、0.4878±0.0021、0.5204±0.0010、0.3985±0.0036、0.4393±0.0015、0.4953±0.0051。A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3組NF-κB p65蛋白的灰度值與GAPDH灰度比值依次為:0.7627±0.0009、0.8146±0.0047、0.8661±0.0034、0.9720±0.0065、0.5548±0.0047、0.7852±0.0061、0.8037±0.0052、0.5214±0.0026、0.7742±0.0039、0.7855±0.0041。A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3組TNF-α的吸光度值依次為:0.0746±0.0032、0.0826±0.0053、0.1201±0.0135、0.1904±0.0135、0.0722±0.0037、0.0821±0.0033、0.0859±0.0031、0.0654±0.0047、0.0748±0.0050、0.0812±0.0042。A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3組IL-10的吸光度值依次為:0.0929±0.0052、0.1290±0.0053、0.0966±0.0037、0.0802±0.0044、0.1940±0.0091、0.1124±0.0078、0.0849±0.0047、0.2573±0.0055、0.2553±0.0087、0.2259±0.0074。A、B、C、D各組間差異有顯著意義(P0.05);B、C、D各組內(nèi)部小組間差異有顯著意義(P0.05);B1、C1與D1小組、B2、C2與D2小組、B3、C3與D3小組組間差異有顯著意義(P0.05)。TREM-1 mRNA的表達(dá)與TREM-1蛋白高度正相關(guān)(r=0.922, P=0.000);TREM-1mRNA表達(dá)水平與NF-κB p65蛋白表達(dá)正相關(guān)(r=0.936, P=0.000),TREM-1蛋白表達(dá)水平與NF-κB p65蛋白表達(dá)正相關(guān)(r=0.795, P=0.000),TREM-1mRNA表達(dá)水平與TNF-α正相關(guān)(r=0.901, P=0.000) ,TREM-1蛋白表達(dá)與TNF-α水平正相關(guān)(r=0.897, P=0.000) ,TREM-1mRNA表達(dá)水平與IL-10負(fù)相關(guān)(r=-0.627, P=0.000) ,TREM-1蛋白表達(dá)水平與IL-10負(fù)相關(guān)(r=-0.661, P=0.000)。在未經(jīng)處理的THP-1細(xì)胞,隨著LPS濃度的升高,TREM-1的表達(dá)增加;在內(nèi)毒素耐受THP-1細(xì)胞,首刺激的濃度相同,TREM-1的表達(dá)隨再刺激LPS的濃度升高而升高,而再刺激相同時(shí),首刺激的LPS濃度越高,TREM-1的表達(dá)量越低;另外,THP-1細(xì)胞中,TREM-1的表達(dá)與NF-κB p65和TNF-α水平正相關(guān),與IL-10負(fù)相關(guān)。 結(jié)論TREM-1在LPS刺激單核/巨噬細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中起信號(hào)放大作用;TREM-1在THP-1細(xì)胞的內(nèi)毒素耐受形成過(guò)程及膿毒癥的發(fā)生過(guò)程中起重要作用。
[Abstract]:Objective to stimulate the THP-1 cell line of human monocytic leukemia two times by using LPS to induce endotoxin tolerance in THP-1 cells. To understand the expression of TREM-1 at the level of nucleic acid and protein, the expression of NF- kappa B at protein level and the relationship between TREM-1 and NF- kappa B in monocyte system during endotoxin tolerance.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：1344088