發(fā)布時間：2017-12-27 14:25

  本文關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌napA基因的克隆表達(dá)和免疫原性的初步研究　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 幽門螺桿菌 napA基因 中性粒細(xì)胞激活蛋白 免疫原性

【摘要】： 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，H．pylori，Hp)是一種微需氧革蘭氏陰性螺旋桿菌，在全球人口中的感染率超過50％。H．pylori感染是慢性胃炎和消化性潰瘍的主要病因，與胃癌、胃粘膜相關(guān)性淋巴樣組織(Mucosa-associated lymphoid tissue，MALT)淋巴瘤的發(fā)生密切相關(guān)，被WHO確定為Ⅰ類致癌因子。研制疫苗將是控制H．pylori感染及相關(guān)疾病經(jīng)濟(jì)有效的途徑。 幽門螺桿菌中性粒細(xì)胞激活蛋白(H．pylori neutropphil-activating protein，HP-NAP)位于細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中，可通過細(xì)菌自溶而釋放，并附著在細(xì)菌外膜表面，介導(dǎo)了H．pylori與細(xì)胞表面的結(jié)合。其能夠趨化和激活中性粒細(xì)胞，導(dǎo)致炎癥。而最新實驗表明，HP-NAP在酸性條件下，能夠結(jié)合甚至濃縮DNA，以保護(hù)DNA免受宿主環(huán)境的損傷�？梢�，HP-NAP在H．pylori的粘附、定植，以及引起的炎癥反應(yīng)中都起到重要作用，是H．pylori重要的致病因子之一。本實驗嘗試了采用基因工程的方法獲得NAP蛋白，并對其免疫原性進(jìn)行了初步的研究。 用PCR從標(biāo)準(zhǔn)株Hp 26695基因組中擴(kuò)增napA基因，并構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a—nap。測序證實克隆片段與GenBank公布序列完全一致。優(yōu)化表達(dá)條件后，pET28a—nap在大腸桿菌中獲得大量表達(dá)，表達(dá)量占菌體蛋白總量的40％。經(jīng)Chelating．F．F．親和柱層析Sephacryl S-200分子篩柱層析后，，獲得了95％以上純度的融合蛋白。與佐劑CpG ODN和LTB聯(lián)合口服免疫小鼠后，可有效誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，產(chǎn)生高水平的IgG，與未加佐劑組相比具有顯著性差異。以上結(jié)果說明融合蛋白NAP聯(lián)合佐劑經(jīng)口服免疫可有效誘導(dǎo)實驗動物產(chǎn)生免疫應(yīng)答，NAP具有良好的免疫原性。 本研究成功構(gòu)建了融合蛋白表達(dá)載體，并獲得了高效的表達(dá)。摸索了純化方案，并對融合蛋白的免疫原性進(jìn)行了初步的研究。為Hp基因工程疫苗的研究和開發(fā)打下了一定的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Helicobacter pylori (H.pylori, Hp) is a micro aerobic gram negative bacillus helix, which has more than 50% in the global population. H.pylori infection is the main cause of chronic gastritis and peptic ulcer. It is closely related to the occurrence of Mucosa-associated lymphoid tissue (MALT) lymphoma and gastric cancer, and is identified as class I carcinogen by WHO. The development of vaccines will be an effective and effective way to control H.pylori infection and related diseases.
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R378

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本文編號：1342065