本文關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌硫氧還蛋白-1基因克隆及其重組蛋白表達(dá)與活性測(cè)定　出處：《北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2014年02期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的:克隆幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)硫氧還蛋白-1(thioredoxin-1,Trx1)基因,構(gòu)建含有該目的基因的原核細(xì)胞表達(dá)載體,表達(dá)純化該蛋白,并檢測(cè)該蛋白活性。方法:以Hp國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株26695的總RNA為模板,設(shè)計(jì)含有酶切位點(diǎn)的特異性引物,用逆轉(zhuǎn)錄PCR的方法擴(kuò)增Hp Trx1的cDNA,連接至pEASY-T1載體構(gòu)建成pEASY-T1-Hp Trx1。對(duì)pEASY-T1-Hp Trx1進(jìn)行雙酶切后將目的片段連接至pET-30a,形成pET-30a-Hp Trx1重組質(zhì)粒,并在大腸桿菌BL21 plys S中進(jìn)行表達(dá)。應(yīng)用鎳柱親和層析純化重組的Hp Trx1蛋白,并檢測(cè)其二硫鍵還原酶的活性。結(jié)果:測(cè)序結(jié)果顯示Hp Trx1 cDNA成功連入pET-30a質(zhì)粒,且與GenBank(HP0824)完全一致。含質(zhì)粒pET-30a-Hp Trx1的大腸桿菌BL21 plys S成功表達(dá)出Hp Trx1蛋白,活性檢測(cè)顯示重組Hp Trx1蛋白具有二硫鍵還原酶的活性。結(jié)論:成功構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-30a-Hp Trx1,并表達(dá)、純化出有活性的Hp Trx1蛋白,為進(jìn)一步研究Hp Trx1的生物學(xué)活性及其對(duì)腫瘤發(fā)生的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京大學(xué)第三醫(yī)院消化科;北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81270475)資助~~
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)作為一種致病菌定植于人體胃內(nèi),全世界約有50%的人群感染Hp,它可以引起萎縮性胃炎、消化性潰瘍,甚至胃癌[1]。Hp與胃黏膜疾病的關(guān)系已被公認(rèn),但并非所有的Hp感染均致病,Hp感染后有一小部分會(huì)發(fā)展為嚴(yán)重的臨床后果。目前的研究認(rèn)為,Hp的致

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1331845