幽門螺桿菌硫氧還蛋白-1基因克隆及其重組蛋白表達與活性測定
本文關鍵詞:幽門螺桿菌硫氧還蛋白-1基因克隆及其重組蛋白表達與活性測定 出處:《北京大學學報(醫(yī)學版)》2014年02期 論文類型:期刊論文
更多相關文章: 幽門螺桿菌 硫氧還蛋白質(zhì)類 重組蛋白質(zhì)類 遺傳載體
【摘要】:目的:克隆幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)硫氧還蛋白-1(thioredoxin-1,Trx1)基因,構建含有該目的基因的原核細胞表達載體,表達純化該蛋白,并檢測該蛋白活性。方法:以Hp國際標準菌株26695的總RNA為模板,設計含有酶切位點的特異性引物,用逆轉(zhuǎn)錄PCR的方法擴增Hp Trx1的cDNA,連接至pEASY-T1載體構建成pEASY-T1-Hp Trx1。對pEASY-T1-Hp Trx1進行雙酶切后將目的片段連接至pET-30a,形成pET-30a-Hp Trx1重組質(zhì)粒,并在大腸桿菌BL21 plys S中進行表達。應用鎳柱親和層析純化重組的Hp Trx1蛋白,并檢測其二硫鍵還原酶的活性。結果:測序結果顯示Hp Trx1 cDNA成功連入pET-30a質(zhì)粒,且與GenBank(HP0824)完全一致。含質(zhì)粒pET-30a-Hp Trx1的大腸桿菌BL21 plys S成功表達出Hp Trx1蛋白,活性檢測顯示重組Hp Trx1蛋白具有二硫鍵還原酶的活性。結論:成功構建原核表達載體pET-30a-Hp Trx1,并表達、純化出有活性的Hp Trx1蛋白,為進一步研究Hp Trx1的生物學活性及其對腫瘤發(fā)生的作用機制奠定了基礎。
【作者單位】: 北京大學第三醫(yī)院消化科;北京大學基礎醫(yī)學院病原生物學系;
【基金】:國家自然科學基金(81270475)資助~~
【分類號】:R378
【正文快照】: 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)作為一種致病菌定植于人體胃內(nèi),全世界約有50%的人群感染Hp,它可以引起萎縮性胃炎、消化性潰瘍,甚至胃癌[1]。Hp與胃黏膜疾病的關系已被公認,但并非所有的Hp感染均致病,Hp感染后有一小部分會發(fā)展為嚴重的臨床后果。目前的研究認為,Hp的致
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