本文關(guān)鍵詞：針對(duì)人Tudor-SN蛋白T103位點(diǎn)的應(yīng)激磷酸化抗體制備及分析　出處：《中國(guó)生物工程雜志》2014年06期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的:針對(duì)人Tudor-SN蛋白T103位點(diǎn)(103位蘇氨酸,Thr103)制備兔源多克隆磷酸化抗體,并進(jìn)行應(yīng)激磷酸化的時(shí)相分析。方法:首先人工合成含磷酸化T103(pT103)位點(diǎn)的多肽,4次免疫新西蘭大白兔后獲取抗血清;然后以AKTA蛋白純化系統(tǒng)進(jìn)行純化,并利用Western blotting和細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)對(duì)純化后的抗pT103抗體進(jìn)行鑒定;最后以In-cell Western法進(jìn)行Tudor-SN蛋白的應(yīng)激磷酸化/去磷酸化時(shí)相性分析。結(jié)果:(1)確定并合成磷酸化多肽"TIENKpTPQGRC",收集約75 ml兔源抗血清,純化后獲取2.08 mg/ml抗pT103抗體;(2)當(dāng)HeLa細(xì)胞受到氧化應(yīng)激時(shí),以pT103抗體檢測(cè)的磷酸化信號(hào)增強(qiáng),可在胞漿中檢測(cè)到顆粒狀信號(hào),與內(nèi)源性Tudor-SN應(yīng)激顆粒存在共定位關(guān)系;(3)在氧化應(yīng)激及應(yīng)激去除后恢復(fù)過程中,T103位點(diǎn)的磷酸化水平呈現(xiàn)一定的波動(dòng)性時(shí)相。結(jié)論:成功制備針對(duì)Tudor-SN蛋白T103位點(diǎn)的兔源多克隆抗pT103抗體,有助于從磷酸化修飾角度進(jìn)行Tudor-SN在細(xì)胞應(yīng)激方面的機(jī)制探討。
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中心;天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院;天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31100967,31170830,31370749,21305103,31300709) 國(guó)家杰出青年基金(31125012) 教育部創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃(IRT13085)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 人類Tudor-SN蛋白參與基因轉(zhuǎn)錄[1]、pre-mRNA剪切[2]、細(xì)胞凋亡[3]等多種生物學(xué)過程。本課題組前期研究結(jié)果表明,當(dāng)真核細(xì)胞受到外界刺激如0.5 mmol/L亞砷酸鈉氧化應(yīng)激或45℃熱休克時(shí),Tudor-SN蛋白可與G3BP(Ras-GAP SH3 domain-binding protein)蛋白結(jié)合,在胞漿中呈顆粒狀聚集

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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3 張佩芬;劉靜宇;張萍;何軍芳;;dsRNA誘導(dǎo)應(yīng)激顆粒形成的研究[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2014年01期

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5 于林;邸研博;楊潔;;沉默SND1重組慢病毒制備及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和侵襲的影響[J];中國(guó)腫瘤臨床;2013年13期

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1328910