本文關(guān)鍵詞：產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的原核表達及純化　出處：《中國生物制品學雜志》2014年10期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的克隆產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin,CPA)全基因,在大腸埃希菌(E.coli)中表達并純化α毒素。方法設計并合成CPA的全基因,插入原核表達載體pET-28a中,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET-28aCPA,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導表達,優(yōu)化表達條件,并對重組蛋白進行純化。結(jié)果雙酶切和測序鑒定結(jié)果表明,CPA基因以正確的閱讀框架克隆入pET-28a載體中;表達的重組蛋白相對分子質(zhì)量約為43 000,主要以可溶性形式表達,最佳培養(yǎng)基為TB培養(yǎng)基,最佳誘導溫度為37℃,誘導時間為3 h;純化的重組蛋白純度達95%以上,濃度為0.663 mg/ml,收率為5 mg/g濕菌。結(jié)論成功在E.coli中表達了CPA,純化后的CPA純度較高,為進一步研究其結(jié)構(gòu)、功能、致病機制及制備抗α毒素人源單鏈抗體奠定了基礎。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院;軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所;吉林省人獸共患預防與控制重點實驗室省部共建重點實驗室;
【分類號】：R378
【正文快照】： 產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)亦稱魏氏梭菌(C.welchii),為革蘭陽性菌,專性厭氧,是引起人食物中毒、氣性壞疽、抗生素相關(guān)性腹瀉以及動物腸毒血癥和痢疾等疾病的主要病原菌[1]。目前已發(fā)現(xiàn)的外毒素至少有16種,但僅α、β、ε、ι毒素以及產(chǎn)氣莢膜梭菌溶素O、腸毒素、

【參考文獻】

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1 孔慶娟;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年01期

2 許崇利;許崇波;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因的定點突變與表達[J];江蘇農(nóng)業(yè)學報;2010年02期

3 張艷平;唐成程;許崇波;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素分子生物學研究進展[J];生物技術(shù)通訊;2013年01期

【共引文獻】

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1 王光華;藺國珍;鄭福英;曹小安;宮曉煒;周繼章;邱昌慶;;D型產(chǎn)氣莢膜梭菌ε毒素基因表達及其免疫保護作用的初步研究[J];中國畜牧獸醫(yī);2012年03期

2 趙宇亮;張聰敏;王琳;霍萍萍;趙寶華;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的研究進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2013年12期

3 霍萍萍;張聰敏;胡明麗;趙宇亮;王琳;高潔;趙寶華;;產(chǎn)氣莢膜梭菌β毒素研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2013年09期

4 冶貴生;馬玉花;韓志輝;鄒勇;賈躍寧;;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌青海分離株α毒素基因分析及其蛋白結(jié)構(gòu)與抗原表位預測[J];動物醫(yī)學進展;2014年08期

5 李箐;辛文文;康琳;高姍;王景林;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素突變體構(gòu)建及其卵黃抗體制備[J];軍事醫(yī)學;2013年09期

6 孫金良;王琳;劉磊;袁f ;張聰敏;趙寶華;;D型產(chǎn)氣莢膜梭菌ε毒素重組蛋白的表達與純化[J];河北師范大學學報(自然科學版);2014年05期

7 宮語晨;許崇利;錢愛東;許崇波;;A型魏氏梭菌α毒素Asp-56基因定點突變與結(jié)構(gòu)分析[J];中國獸藥雜志;2014年06期

8 劉穎;王健;張會英;趙艷;王艷;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因片段克隆的測序與應用[J];中華醫(yī)院感染學雜志;2014年20期

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1 宋佰芬;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因在干酪乳桿菌基因組中的表達及免疫效果評價[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2014年

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1 尹美玲;痰培養(yǎng)標本驗收及結(jié)果評價[D];蚌埠醫(yī)學院;2013年

2 邱慧玲;麋鹿產(chǎn)氣莢膜梭菌病的流行病學調(diào)查[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2012年

3 李箐;產(chǎn)氣莢膜梭菌α、ε毒素突變體構(gòu)建及應用[D];安徽醫(yī)科大學;2013年

4 劉晶晶;雞源魏氏梭菌的耐藥性分析及抗菌肽抑菌特點的檢測[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2013年

5 呂長輝;青島地區(qū)規(guī)模化兔場產(chǎn)氣莢膜梭菌流行株毒素型、遺傳多樣性和耐藥性調(diào)查研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2013年

6 韓廣偉;產(chǎn)氣莢膜梭菌α、β_1、β_2、ε毒素蛋白的共表達及免疫原性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2014年

【二級參考文獻】

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1 張紅英;楊霞;陳麗穎;王亞賓;金鉞;鄭杰;盧中華;;抗A型產(chǎn)氣莢膜梭菌單克隆抗體的研制和鑒定[J];中國畜牧獸醫(yī);2006年09期

2 許崇波;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素分子生物學的研究進展[J];寧夏大學學報(自然科學版);2002年02期

3 趙寶華,許崇波;抗A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素單鏈抗體基因的克隆和表達[J];生物工程學報;2001年05期

4 許崇波,許崇利,劉慶平,朱永寧,曾瑾,王玉炯;C型產(chǎn)氣莢膜梭菌α、β_1毒素基因的融合[J];中國生物工程雜志;2005年05期

5 許崇波,曾瑾,許崇利,王玉炯;C型產(chǎn)氣莢膜梭菌β_1、β_2毒素基因的融合[J];微生物學報;2005年02期

6 許崇波;許崇利;趙志軍;;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因表達及其免疫保護作用的初步研究[J];微生物學報;2006年04期

7 王開功,周碧君,王琛,方英,李海闊,文明;魏氏梭菌α-毒素基因探針的制備及應用[J];畜牧獸醫(yī)學報;2004年02期

8 許崇波;j躍;許崇利;高鳳山;竇永喜;才學鵬;;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素His-68基因的定點突變與結(jié)構(gòu)分析[J];中國獸醫(yī)科學;2010年08期

9 許崇波;陳向東;許崇利;逄越;高鳳山;;C型產(chǎn)氣莢膜梭菌α、β_1、β_2毒素基因融合及免疫原性研究[J];浙江大學學報(農(nóng)業(yè)與生命科學版);2008年04期

10 許崇波,趙寶華,馬從林,馮書章,朱平;抗A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素單鏈抗體的基因克隆及核苷酸序列分析[J];中國獸醫(yī)學報;2000年03期

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1 郭宏偉;鹿出血性腸炎疫苗研制及產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因序列分析[D];山西農(nóng)業(yè)大學;2004年

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2 王俊虹;康琳;高姍;王景林;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素及其檢測[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2009年12期

3 許崇波;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素研究進展[J];國外醫(yī)學(微生物學分冊);1998年03期

4 許崇波,朱平,馬從林,石瑾琪,馮書章;抗A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素單克隆抗體雜交瘤細胞系的建立及鑒定[J];細胞與分子免疫學雜志;1999年01期

5 許崇波;許崇利;趙志軍;;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因表達及其免疫保護作用的初步研究[J];微生物學報;2006年04期

6 黃翠芬;莊漢瀾;王明道;;產(chǎn)氣莢膜桿菌α毒素及抗毒素測定法研究[J];人民軍醫(yī);1960年S1期

7 王景林,王利春,吳東林,康琳,姜永強;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因的克隆及高效表達[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2004年01期

8 李箐;辛文文;康琳;高姍;王景林;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素突變體構(gòu)建及其卵黃抗體制備[J];軍事醫(yī)學;2013年09期

9 許崇波,朱平,姚湘燕,馬從林,馮書章;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素保護性抗原基因的高效表達[J];衛(wèi)生研究;1998年S1期

10 朱玉琨,閏偉,陳志龍,張和君,郭仁;A型產(chǎn)氣莢膜桿菌α毒素單克隆抗體對小鼠治療作用的觀察[J];細胞與分子免疫學雜志;1989年03期

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1 林明輝;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因的克隆、表達及免疫學活性研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2003年

2 孫佳芝;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立及初步應用[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2014年

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