發(fā)布時間：2017-12-18 05:12

  本文關(guān)鍵詞：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)方法優(yōu)化

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【摘要】：目的建立一個分離、培養(yǎng)、純化大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的方法。方法使用貼壁法分離大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,通過培養(yǎng)初期的頻繁換液和傳代過程中減少胰蛋白酶的暴露時間,達(dá)到骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的純化。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物,MTT法檢測細(xì)胞生長狀況,暴露于不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基使細(xì)胞成骨、成脂,并向肝膽系分化。結(jié)果分離所得的細(xì)胞陽性表達(dá)CD29、CD44、CD90,而對于造血細(xì)胞標(biāo)志物CD45呈陰性。在成骨、成脂培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下,細(xì)胞ALP、茜素紅、油紅O染色均呈陽性,并發(fā)現(xiàn)傳至10代的細(xì)胞仍保持分化功能。將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞貫續(xù)暴露于不同的細(xì)胞因子和激素,得到了表達(dá)肝細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞特異標(biāo)志的子代細(xì)胞。結(jié)論通過改良后的方法可以高效、簡潔地分離出形態(tài)均一的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并能夠向多胚層的細(xì)胞分化。
【作者單位】： 陜西省人民醫(yī)院;西安交通大學(xué)第三附屬醫(yī)院腫瘤外科;延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院;西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝膽外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81170455) 陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程項目(2011KJCL03-13)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 20世紀(jì)60年代,Friedenstein等[1]首先在骨髓基質(zhì)間發(fā)現(xiàn)了間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)。MSCs作為一種成體干細(xì)胞,具有自我更新和多向分化的潛能。近年來研究表明,MSCs具有廣泛地可塑性,暴露于不同的微環(huán)境,可使其基因重組并向全部3個胚層的細(xì)胞分化,包括肺泡上皮細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素、皮膚

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本文編號：1302931