發(fā)布時(shí)間：2017-12-17 02:07

  本文關(guān)鍵詞：原代小鼠肝臟細(xì)胞的高效分離純化與培養(yǎng)

  更多相關(guān)文章： 肝臟細(xì)胞 原代細(xì)胞培養(yǎng) 分離 純化 小鼠

【摘要】：目的:建立一種能穩(wěn)定獲得高活力和高純度原代小鼠肝臟細(xì)胞的分離、純化及培養(yǎng)方法。方法:應(yīng)用改良的Seglen二步法原位灌注和機(jī)械離心分離肝臟細(xì)胞,并用改良的高糖DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)接種時(shí)肝臟細(xì)胞的存活率,倒置顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察肝臟細(xì)胞形態(tài)變化,應(yīng)用免疫熒光技術(shù)對(duì)肝臟細(xì)胞進(jìn)行Albumin染色。結(jié)果:每只小鼠可獲取肝臟細(xì)胞的總產(chǎn)量平均為1.35×106/g體重,肝臟細(xì)胞存活率90%。倒置顯微鏡下觀察貼壁前肝細(xì)胞直徑為35.14μm±4.35μm,肝臟細(xì)胞在接種后3 h基本完成貼壁;肝臟細(xì)胞接種后24h,所有肝臟細(xì)胞均強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)成熟肝臟細(xì)胞標(biāo)志物Albumin,肝細(xì)胞純度95%。結(jié)論:改良的分離純化及培養(yǎng)方法能穩(wěn)定獲得高產(chǎn)量、高活率及高純度的小鼠肝臟細(xì)胞。
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院普外科;
【基金】：上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)基金項(xiàng)目(09ZR1405900)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 前言肝臟是機(jī)體最重要的器官之一[1],肝細(xì)胞具有豐富的酶系及多種特異性功能[2]。體外分離和培養(yǎng)的肝細(xì)胞被廣泛用于病理學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)、毒理學(xué)和致癌作用等基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究[3-5],并且肝細(xì)胞移植對(duì)于急性肝功能衰竭、肝硬化等是一種具有巨大潛力的治療方式[6-8]。與其他動(dòng)物相比

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 徐哲;肝細(xì)胞原代培養(yǎng)的常用添加物[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊(cè));2002年06期

2 劉禹;蘭海楠;李維;楊艷紅;付志玲;馬思慧;吳天成;郭風(fēng);趙雪;張輝;崔煥忠;吳e，

本文編號(hào)：1298322