本文關(guān)鍵詞：Raw264.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化誘導(dǎo)培養(yǎng)體系的改良

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【摘要】：目的:通過(guò)改良細(xì)胞培養(yǎng)方案建立體外誘導(dǎo)Raw264.7細(xì)胞分化形成成熟破骨細(xì)胞(OC)的高效培養(yǎng)體系。方法:向Raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO2、37℃孵箱中培養(yǎng)12d,每3d換液1次,每次換液前對(duì)細(xì)胞進(jìn)行短暫消化。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,并利用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、FITCphalloidin染色和免疫熒光染色鑒定OC是否成熟并具有吞噬功能。結(jié)果:通過(guò)改良培養(yǎng)方法,在誘導(dǎo)過(guò)程中培養(yǎng)孔內(nèi)的大部分區(qū)域始終保持單層細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。鏡下觀察和HE染色,誘導(dǎo)第12天時(shí)OC胞體覆蓋培養(yǎng)面積的70%;FITC-phalloidin染色,伴隨著OC成熟,偽足內(nèi)出現(xiàn)的束狀偽足小體逐漸變?yōu)榄h(huán)形,最終融合帶狀肌動(dòng)蛋白環(huán)環(huán)繞在胞質(zhì)周圍;免疫熒光染色,誘導(dǎo)12d后OC表達(dá)的降鈣素受體(CTR)較前體細(xì)胞顯著增加,TRAP染色顯示OC胞漿內(nèi)呈現(xiàn)大量紅色顆粒。提示獲得的OC成熟并具有吞噬功能。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)改良培養(yǎng)方法,聯(lián)合應(yīng)用細(xì)胞因子50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3建立了體外誘導(dǎo)Raw264.7細(xì)胞分化形成成熟OC的高效培養(yǎng)體系。
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程學(xué)系;吉林大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)外科;吉林大學(xué)第一醫(yī)院兒科;吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)系;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助課題(31101249)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 健康成人的骨組織處于一種不斷更新和重建的狀態(tài)。骨重建是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程,包括骨吸收和骨形成[1]。其中行使骨吸收功能的細(xì)胞主要是破骨細(xì)胞(osteoclast,OC)[2],行使骨形成功能的細(xì)胞是成骨細(xì)胞(osteoblast,OB)。正常生理?xiàng)l件下兩者處于一種動(dòng)態(tài)平衡,如果這種平衡被打破就會(huì)發(fā)

【相似文獻(xiàn)】

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