本文關(guān)鍵詞：包被傷寒Vi多糖抗原檢測鼠血清中傷寒沙門菌抗體的間接ELISA方法的建立

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【摘要】：目的建立檢測傷寒沙門菌(Salmonella typhi)抗體的間接ELISA方法,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法對常規(guī)間接ELISA方法進(jìn)行優(yōu)化,確定抗原最適包被質(zhì)量濃度及被檢血清最佳稀釋度、最適包被溫度及時間、包被抗原與血清的最適溫度和時間、血清與酶標(biāo)二抗及封閉的最適溫度和時間、酶標(biāo)二抗最適工作質(zhì)量濃度,并驗(yàn)證該方法的靈敏度、精密性、特異性及耐用性;用傷寒Vi多糖結(jié)合物原液和傷寒Vi多糖衍生物經(jīng)小鼠大腿內(nèi)側(cè)皮下免疫,分別于免疫后第14、21、28、35天,經(jīng)眼眶采全血,分離血清,應(yīng)用建立的間接ELISA方法檢測抗體水平,計(jì)算抗體幾何平均滴度(GMT)。結(jié)果確定了間接ELISA方法最適工作條件:傷寒Vi莢膜多糖抗原最適包被質(zhì)量濃度為5μg/ml,血清最佳稀釋倍數(shù)為1∶40;最適包被溫度及時間為4℃12 h;包被抗原與血清最適反應(yīng)溫度和時間為37℃2 h;血清與酶標(biāo)二抗最適反應(yīng)溫度和時間為37℃1 h;封閉液最適封閉溫度和時間為室溫1 h;HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG最佳反應(yīng)濃度為1∶8 000。該方法靈敏度為1∶1 600;孔間和板間CV平均值分別為2.8%和5.8%;與其他血清無交叉反應(yīng);pH值、包被時間、包被溫度及酶結(jié)合時間調(diào)整前后,同一樣品檢測的A450值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。傷寒Vi多糖與蛋白載體偶聯(lián)后,免疫原性明顯增強(qiáng),且白喉類毒素(diphtheria toxin DT)和重組銅綠假單胞菌外毒素A(recombinantPseudomonasaeruginosaexotoxinA,rEPA)兩種不同載體偶聯(lián)得到的結(jié)合物免疫原性無明顯差異。結(jié)論成功建立了一種檢測傷寒沙門菌抗體的間接ELISA方法,該方法具有較強(qiáng)的特異性、靈敏度及精密性。
【作者單位】： 云南沃森生物技術(shù)股份有限公司;
【基金】：云南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014BC003)
【分類號】：R392-33;R378.22
【正文快照】： 傷寒是由腸道沙門菌傷寒桿菌引起的以發(fā)熱為主要表現(xiàn)的一種急性腸道傳染病,是一種全球性的公共衛(wèi)生問題。目前全球每年約有2 200萬感染者,導(dǎo)致約22萬的死亡病例[1]。傷寒沙門菌(Sal-monella typhi)是一種有強(qiáng)致病力的細(xì)菌,半數(shù)感染量為105個細(xì)菌[2]。20世紀(jì)40年代抗生素的出現(xiàn)

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李鐵民,徐浩,江崎孝行;單核吞噬細(xì)胞應(yīng)答傷寒沙門菌的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國公共衛(wèi)生;2003年01期

2 宋國蓉;黃瑞;;傷寒沙門菌致病物質(zhì)的研究進(jìn)展[J];微生物與感染;2007年03期

3 李鐵民,徐浩,江崎孝行;傷寒沙門菌Vi抗原作為毒力因子的特性研究[J];中國公共衛(wèi)生;2002年01期

4 邵榮標(biāo),錢績虎,劉玲;傷寒沙門菌生化特性分析[J];南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年03期

5 江滟 ,王和;細(xì)胞壁缺陷對傷寒沙門菌蘋果酸脫氫酶活性影響的實(shí)驗(yàn)觀察[J];貴州醫(yī)藥;2001年10期

6 王鳴柳,董柏青,闞飆,李翠云,唐振柱,譚冬梅,權(quán)怡,楊進(jìn)業(yè);廣西傷寒沙門菌16s rRNA的基因多態(tài)性分析[J];廣西預(yù)防醫(yī)學(xué);2002年04期

7 薄志堅(jiān),劉丹紅,王敏,萬強(qiáng),王秀萍;遼寧地區(qū)傷寒沙門菌的擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分析[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2005年10期

8 黃瑞,焦e，

本文編號：1250171