發(fā)布時(shí)間：2017-11-30 13:08

  本文關(guān)鍵詞：艱難梭菌毒素B受體結(jié)合區(qū)CDB3融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化及其純化

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【摘要】：目的優(yōu)化艱難梭菌毒素B受體結(jié)合區(qū)CDB3融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件,在獲得高表達(dá)融合蛋白后對(duì)其進(jìn)行純化,為艱難梭菌毒素B受體結(jié)合區(qū)CDB3單克隆抗體的制備奠定基礎(chǔ)。方法以誘導(dǎo)前菌液600nm處的光密度值(OD600)、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)劑異丙基-β-D巰基半乳糖苷(IPTG)濃度和誘導(dǎo)時(shí)間為單變量,分別誘導(dǎo)融合蛋白的表達(dá),在此基礎(chǔ)上采用正交試驗(yàn)對(duì)融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化,通過十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳半定量分析融合蛋白的表達(dá)量及表達(dá)形式,以Western blot對(duì)融合蛋白進(jìn)行鑒定,以GST親和層析柱對(duì)融合蛋白進(jìn)行純化。結(jié)果融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的最佳條件為誘導(dǎo)前菌液OD600 0.8、IPTG濃度0.6mmol/L、誘導(dǎo)時(shí)間12h、誘導(dǎo)溫度30℃,融合蛋白以可溶性蛋白表達(dá)形式為主,經(jīng)純化后,融合蛋白純度超過90%。結(jié)論本研究成功優(yōu)化了艱難梭菌毒素B受體結(jié)合區(qū)CDB3融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)條件,獲得大量表達(dá),并成功對(duì)其進(jìn)行了純化,為后續(xù)單克隆抗體的制備奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：湖南省發(fā)改委2013年產(chǎn)業(yè)研發(fā)項(xiàng)目[湘發(fā)改高技(2013)1132號(hào)]
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 艱難梭菌是一種革蘭陽性厭氧芽孢桿菌,是院內(nèi)腸道感染的主要致病菌之一[1-2]。近年來,艱難梭菌感染性疾病發(fā)病率,尤其是毒素陽性患者檢出率有所升高,此類患者的病情通常較為嚴(yán)重,患者病死率較高[3-7]。目前,可用于艱難梭菌檢測的方法較多,相對(duì)常見是酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行毒素檢

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1239400