本文關(guān)鍵詞：弓形蟲(chóng)棒狀體蛋白2多克隆抗體制備純化及其在免疫熒光定位中的運(yùn)用

  更多相關(guān)文章： 剛地弓形蟲(chóng) 棒狀體蛋白 多克隆抗體 免疫熒光定位

【摘要】：目的制備弓形蟲(chóng)棒狀體蛋白2(ROP2)多克隆抗體并純化。方法將已構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET32aROP2轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,用0.5 mmol/L異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白R(shí)OP2,分離上清和包涵體,包涵體洗滌后,用尿素溶解;取純化蛋白與等體積福氏完全佐劑或不完全佐劑混合,背部皮下免疫新西蘭大白兔3次,200μg/次,3次免疫之間分別間隔14 d和19 d,末次免疫10 d后收集兔血清,親和純化柱純化,并用間接ELISA檢測(cè)抗體效價(jià),蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)分析抗體特異性。將弓形蟲(chóng)速殖子感染人包皮成纖維細(xì)胞(HFF細(xì)胞),利用制備所得的多克隆抗體采用免疫熒光法檢測(cè)ROP2在感染細(xì)胞中的定位。結(jié)果通過(guò)誘導(dǎo)表達(dá),獲得重組蛋白R(shí)OP2,制備的兔源性ROP2抗體純化后為單一蛋白抗體。間接ELISA結(jié)果顯示,抗體滴度為1∶102 400;Western blotting結(jié)果顯示,抗體特異性良好。同時(shí),免疫熒光定位試驗(yàn)結(jié)果顯示,ROP2定位在弓形蟲(chóng)的納蟲(chóng)泡膜上。結(jié)論本研究制備并純化了抗弓形蟲(chóng)ROP2的兔源性多克隆抗體,并成功應(yīng)用于ROP2在弓形蟲(chóng)納蟲(chóng)泡膜上的免疫熒光定位試驗(yàn)。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81071377,81271866) 國(guó)家教育部博士點(diǎn)基金(No.20104433120014) 廣東省人才引進(jìn)專(zhuān)項(xiàng)資金(No.2011-26)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)是一種細(xì)胞內(nèi)專(zhuān)性寄生原蟲(chóng),可引起人獸共患弓形蟲(chóng)病[1]。人誤食被弓形蟲(chóng)卵囊污染的食物和水,或含弓形蟲(chóng)包囊的動(dòng)物肉類(lèi)而感染[2]。弓形蟲(chóng)入侵宿主細(xì)胞后以納蟲(chóng)泡的形式在宿主細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)和繁殖,而納蟲(chóng)泡膜主要為宿主細(xì)胞膜,以及弓形蟲(chóng)分泌細(xì)胞器

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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1 鄭斌;何藹;李卓雅;鄭小英;張瑞琳;楊瀟;詹希美;;弓形蟲(chóng)MIC 6羧基端蛋白片段的表達(dá)及其多克隆抗體的制備[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2009年09期

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊敏;王鎖英;許小朋;馬潔;毛朝明;仝佳;邱谷風(fēng);胡正軍;王勝軍;邵啟祥;許化溪;;人T-bet基因的表達(dá)、純化及其多克隆抗體的制備[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

2 張敏;池霞;洪琴;童梅玲;郭錫熔;;人類(lèi)肥胖相關(guān)新基因LYRM1多克隆抗體的制備及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

3 陳波;錢(qián)，

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