兩種脫礦體系制備人工齲損的病理學(xué)比較
本文關(guān)鍵詞:兩種脫礦體系制備人工齲損的病理學(xué)比較,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
2008年1月 第18卷第1期
CHINESE
中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志
JOURNAL
OF COMPARATIVE MEDICINE
January-,2008
-q01.18 No 1
jP!矗、g}翰呂、訇
§研究報(bào)告5
b、。、±=、t;}、%、』
兩種脫礦體系制備人工齲損的病理學(xué)比較
楚金普1,郝玉慶2,李繼遙2,周學(xué)東2
(1.鄭州大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院牙體牙髓病科,鄭州450052;2.四川大學(xué)口腔生物醫(yī)學(xué)工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,成都610041)
【摘要】
目的
評(píng)價(jià)兩種不同脫礦體系在人牙釉質(zhì)與牛牙釉質(zhì)形成人工齲樣損害的情況,確定模擬早期齲實(shí) 兩種脫礦體系:部分飽和酸緩沖溶液和酸性凝膠溶液,分別在人牙釉質(zhì)與牛牙釉質(zhì)制 部分飽和
驗(yàn)研究的脫礦系統(tǒng)。方法
備人工早期釉質(zhì)齲損,采用偏振光顯微鏡和掃描電子顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)人工齲的組織病理學(xué)變化。結(jié)果
的酸緩沖體系制備的人工齲損都具有完整的表層和表層下脫礦,牛牙釉質(zhì)除了脫礦深度大于人牙釉質(zhì)外,其它病 理學(xué)特點(diǎn)都類(lèi)似于人牙釉質(zhì),與早期自然齲損相似。而凝膠液脫礦體系形成的人工齲損不管是人牙還是牛牙都沒(méi) 有明顯的表層結(jié)構(gòu),實(shí)驗(yàn)牙表面多出現(xiàn)被腐蝕或溶解。結(jié)論 部分飽和的酸緩沖液脫礦系統(tǒng)形成的人工齲損病理
學(xué)變化更接近于自然齲;與人牙具有相似化學(xué)組成的牛牙很適合代替人牙來(lái)檢測(cè)脫礦和再礦化的效果。 【關(guān)鍵詞】 脫礦溶液;人工齲;病理學(xué)研究 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1671—7856(2008)01.0023—03
【中圖分類(lèi)號(hào)】R783.1
Pathological Comparison of Two Type of Demineralization Solutions
on
the Production of Initial Artificial Enamel CariOUS Lesion
CHU
Jin—pul,HAO Yu—qin92,LI Ji—yao‘,ZHOU Xue.dongz
(1.Department of Cariology and Endodontology,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China;
2.Key Laboratory of Oral Biomedical Engineering of Ministry of Education,Sichuan University,Chengdu
610041,China)
【Abstract】Objective
To determine the effect of
two
type
of demineralization
solutions
on
the production
of artificial
an
carious lesion in bovine enamel and human enamel in hydroxyethyleellulose gel system
were
vitro.Methods
A partially saturated acidic buffer solution and
acidifed
used
as
decalcifying media for the preparation of initial artificial carious lesion in bovine specimens
was
enamel and human enamel.After demineralization,these enamel microscope and compared in histological pathology.Results
observed
by
microscope
a
and scaning electron
The results indicated all
were
specimens in
as
partially saturated acidic
buffer solution could morphologically Lesions in bovine teeth
were
form
subsurface
to
demineralization,which
the same
the early smooth enamel caries.
was
pathologically similar
those in human teeth,except that the lesions depth
were
deeper than those in either eroded
a or
human teeth.However,In gel,regular subsurface lesions dissolved.Conclusion It
was
hardly produced in all
specimens.They
were
concluded that caries—like lesions could be consistently produced in bovine enamel with
can
partially
saturated acidic buffer solution.So this demineralization system in dental enamel.
be
use
for reproducible
preparation of artificial carious lesions
【Key words】Demineralization
solutions;Artificial caries;Pathological study
齲病是細(xì)菌代謝碳水化合物產(chǎn)酸,引起牙齒硬
[基金項(xiàng)目] 國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)資助項(xiàng)目(30430800)。
組織脫礦的結(jié)果。在齲病的研究中,由于自然形成
[作者簡(jiǎn)介]楚金普(1974一)講師,博士,主要從事齲病的病因與防治研究。 [通訊作者] 周學(xué)東(1957一)女,教授,博士,主要從事齲病的病因與防治研究。
萬(wàn)方數(shù)據(jù)
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2008,V01.18
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早期齲的時(shí)間長(zhǎng),一般在6~18?jìng)(gè)月,結(jié)構(gòu)多變,影 響因素多,使齲損的形成和再礦化機(jī)制無(wú)法在實(shí)驗(yàn) 室進(jìn)行研究。為了研究齲病發(fā)生機(jī)制以及有效防治 方法,人工齲實(shí)驗(yàn)被廣泛應(yīng)用¨。。人工齲實(shí)驗(yàn)的關(guān) 鍵是模擬自然齲形成的條件和環(huán)境,盡可能的使人 工齲在破壞方式、病理改變特征上接近自然齲損。 本研究的目的是評(píng)價(jià)兩種不同脫礦體系體外形成的 人工齲損,并以牛牙釉質(zhì)與人牙釉質(zhì)做比較,為齲病 的實(shí)驗(yàn)研究提供更接近自然齲的脫礦體系。 1材料與方法 1.1實(shí)驗(yàn)牙齒的制備 為達(dá)到統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),本實(shí)驗(yàn)選擇切牙為實(shí)驗(yàn)牙 齒。選擇新鮮拔除的牛切牙和因外傷拔除的正常人 切牙,去除表面有機(jī)污染物,分離冠根,冠部超聲清 洗,干燥,體視顯微鏡下觀察無(wú)齲損、氟斑、裂痕。用 高速硬組織切割機(jī)將牙冠成5
mm×5 mm×2 mm
目的砂紙拋光,吸水干燥后,將載玻片放入二甲苯 中,使混合膠溶解,磨片與載玻片分離。每個(gè)樣本制 備2張磨片,浸水24 h后用偏光顯微鏡觀察。 1.5掃描電鏡觀察
實(shí)驗(yàn)牙齒從脫礦系統(tǒng)中取出立即放入2.5%戊
二醛液內(nèi)固定24 h、4℃。轉(zhuǎn)移到1%鋨酸液內(nèi)固定
2
h,用0.025 mol/L磷酸緩沖液漂洗,經(jīng)50%無(wú)水乙
醇逐級(jí)脫水,臨界點(diǎn)干燥,鍍金,掃描電鏡下觀察,工 作電壓為25 2結(jié)果
KV。
牙釉質(zhì)齲損最重要的病理特征就是具有完整表
層的表層下脫礦¨1。當(dāng)早期釉質(zhì)齲損經(jīng)不同折射系 數(shù)的媒介浸漬后用偏光顯微鏡觀察時(shí),可呈不同的 分層現(xiàn)象,當(dāng)用水(折射率=1.33)浸漬磨片,偏光顯 微鏡下觀察多孔的表層下釉質(zhì)呈正性雙折射(不透 光)而表層呈負(fù)性雙折射。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,脫礦
大小的釉質(zhì)塊,唇面釉質(zhì)用拋光機(jī)及800}}一1200#一 2400#碳化硅砂在流水下紙依次磨平、拋光,去除表 層約150 ptm,以消除表面有機(jī)污染物和表面的不規(guī) 則。自然干燥,釉質(zhì)塊表面開(kāi)窗4 部位涂布兩層抗酸指甲油。 1.2脫礦體系的配制 1.2.1部分飽和酸緩沖脫礦系統(tǒng)∽1:2.2 (NO,)2、2.2
mmol/LKH2P04、50 mmol/LCa mm×4
后,部分飽和的酸緩沖溶液處理的釉質(zhì)樣本,不管是
牛牙還是人牙,在偏振光顯微鏡下都形成以表層下
脫礦為主要特征的病理改變,可見(jiàn)明顯呈負(fù)性雙折
射的表層和緊接下面呈正性雙折射的病損體部(圖
mm,其余
1,圖2),牛牙的脫礦深度要比人牙的深;而凝膠溶 液處理的樣品幾乎都沒(méi)有明顯的表層,表面許多被
腐蝕或溶解,只見(jiàn)呈正性雙折射(不透光)的病損區(qū) (圖3,圖4)。 在掃描電子顯微鏡下觀察,正常釉質(zhì)表面光滑。 mmol/L醋酸、1.0
mmol/L NaN3、0.1
mmol/LNaF,pH用5 mol/L的KOH
調(diào)至4.5。 1.2.2酸化凝膠脫礦系統(tǒng)【31:0.1 mol/L乳酸、6%w/ v羥乙基纖維素,pH用0.1 mol/L的NaOH調(diào)至4.5。 1.3實(shí)驗(yàn)方法 根據(jù)不同的脫礦溶液和牙齒的種類(lèi)將實(shí)驗(yàn)分為 4組:(a)部分飽和的酸緩沖溶液+牛切牙組(b)部 分飽和的酸緩沖溶液+人切牙組(c)酸性凝膠溶液 +牛切牙組(d)酸性凝膠溶液+人切牙組。將預(yù)備 好的牙齒標(biāo)本用嵌體蠟固定在自制的環(huán)形玻棒上, 分別放人盛有不同脫礦系統(tǒng)的玻璃器皿中,牙齒表 面與溶液的比率為25
mm2/10
脫礦后,酸緩沖溶液組病變表面脫礦較輕,牙釉質(zhì)表
面呈現(xiàn)帶有很多凹坑狀的、不規(guī)則的外觀,每一個(gè)凹 陷代表一條釉柱末端的破壞,牛牙與人牙略有不同, 且凹坑略大于人牙,在高倍下,可清楚見(jiàn)到釉柱的中
心溶解破壞,可見(jiàn)較清晰的、成束的晶體顆粒,這些 顆;蚨袒蜷L(zhǎng),方向排列一致,大多呈棒狀末端或不 規(guī)則外形,牛牙的晶體顆粒較人牙的稍粗(圖5~ 8)。而凝膠溶液組病變表面脫礦較重,牙釉質(zhì)樣本 表面呈明顯的腐蝕狀外觀,釉柱間質(zhì)溶解比較嚴(yán)重,
使釉柱頭顯得較為突出,呈疊瓦狀,牛牙釉質(zhì)釉柱明
mL,其中部分飽和酸
顯大于與人牙;在高倍下元論牛牙還是人牙,晶體溶
解嚴(yán)重,晶體結(jié)構(gòu)破壞(圖9~12)。 3討論
緩沖脫礦系統(tǒng),37℃,磁攪拌儀攪拌(100 r/min);酸
化凝膠脫礦系統(tǒng),25℃,不攪拌。脫礦4 d,取出實(shí)驗(yàn)
牙齒,分別作偏振光顯微鏡和掃描電鏡觀察分析。 1.4偏光顯微鏡觀察 偏光顯微鏡的磨片采用貼附制備法。用自凝塑 膠將牙齒包埋,高速硬組織切割機(jī)從釉質(zhì)開(kāi)窗區(qū)的 中央將牙齒鋸開(kāi),然后切成約300 btm厚的牙片,用 蜂蠟和冷杉膠混合膠將牙片貼附于載玻片上,待冷 固后,流水下磨制成薄片,約100 ptm;用粒度為1
200
使用人工齲實(shí)驗(yàn)技術(shù)大大增加了我們對(duì)齲齒發(fā) 生過(guò)程中脫礦和再礦化過(guò)程的認(rèn)識(shí)。組織病理學(xué)研 究表明,自然齲損的最重要的特點(diǎn)就是具有完整表 層的表層下脫礦H。。采用人工方法研究齲病的發(fā) 生,最重要的條件就是要求產(chǎn)生的人工齲與自然齲 損愈相似愈好。人工齲雖然不能和自然齲完全一
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圖1部分飽和的酸緩沖溶液+牛切牙組偏光顯微鏡照片×100;圖2部分飽和的酸緩沖溶液+人切牙組偏光顯微鏡照片×100;圖3凝 膠溶液+牛切牙組偏光顯微鏡照片×100;圖4凝膠溶液+人切牙組偏光顯微鏡照片×100;圖5酸緩沖溶液+牛切牙組掃描電鏡x 000;圖6酸緩沖溶液+牛切牙組掃描電鏡x
30 3
000;圖7酸緩沖溶液+人切牙組掃描電鏡×3 000;圖8酸緩沖溶液+人切牙組掃描
電鏡×30 000;圖9凝膠溶液+牛切牙組掃描電鏡×3 000;圖10凝膠沖溶液+牛切牙組掃描電鏡×30 000;圖11凝膠溶液+人切牙 組掃描電鏡×3 000;圈12凝膠沖溶液+人切牙組掃描電鏡×30
Fig.1 Polarized light microscopic pictures of lesions from bovine enamel microscopic pictures of lesions from human enamel 000. with
a
partially saturated acidic
buffer
solution.(scale
bar=100
mm):Fig.2
PoIarized of lesions
Polarized light light
with
a
partially saturated acidic
buffer solution.(seale bar=100 am);Fig.3
Polarized light
a
microscopic
pictures of lesions from with acidifed gel 000
bovine enamel with bar=100
acidifed
gel
system(scale
bar=100
mm);Fig.4
microscopic pictures
from human enamel
system(scale
Inn):Fig.5 from
SEM pictures bovine enamel
of lesions from bovine enamel with with
8
partially saturated acidic buffer
solution(scale
bar=3 SEM
lnln);Fig.6
SEM pictures
of lesions
a
partially saturated
acidic
bar=30
buffer 000
solution(scale mm);Fig.8
bar=30 000 SEM pictures
mm);Fig.7
of lesions from with aeidifed Fig.11 with
pictures of lesions from with
a
human enamel with
partially saturated acidic
buffer solution(scale mill);Fig.9
with
human enamel
partially saturated acidic 000
buffer solution(scale
bar=3 000
SEM
pictures of gel
lesions from bovine enamel bar=30 000
gel
system(SCale bar=3
pictures of lesions from
mm);Fig.10
mm).
SEM pictures of lesions from
bovine enamel 000
acidifed
system(scale
mm):
SEM gel
human enamel with 000
acidifed
gel
system(scale bar=3
ulm);Fig.12
SEM pictures of lesions from huInan enamel
acidifed
system(scale bar=30
樣,但能模擬齲病的主要病變的發(fā)生發(fā)展過(guò)程,對(duì)研 究齲病發(fā)病機(jī)理、探索防治措施具有重要意義。目
和位于其下呈正性雙折射的病損體部,完全符合自
然早期釉質(zhì)齲損表層下脫礦的重要病理特征。經(jīng)酸
前,真正在實(shí)驗(yàn)室完全可控制條件下制備人工齲的
方法,只有化學(xué)法。脫礦的基本過(guò)程依次為酸擴(kuò)散 進(jìn)入釉質(zhì),與晶格離子發(fā)生反應(yīng)和反應(yīng)產(chǎn)物的溶 出b J,這種酸脫礦致齲作用就是化學(xué)法制備人工齲
性凝膠脫礦系統(tǒng)形成的人工齲沒(méi)有明顯的表層,表
面大多被酸蝕或溶解。
掃描電子顯微鏡觀察,部分飽和的酸緩沖脫礦 系統(tǒng)形成的人工齲釉質(zhì)表層相對(duì)完整,但表面釉柱 形態(tài)破壞,釉柱中心溶解凹下,不規(guī)則的多孑L狀外觀 結(jié)構(gòu)增多,但凹較淺,這些多孑L狀結(jié)構(gòu)是加深的 Tome’S突和拓寬的釉拄鞘,與Moller等№o觀察到的 自然齲的表面結(jié)構(gòu)相似。酸化凝膠脫礦系統(tǒng)形成的 人工齲表面呈明顯的酸蝕樣外觀,釉柱外周溶解,中 心突出,邊界清晰,呈典型的魚(yú)鱗狀。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)牛牙與人牙的比較,發(fā)現(xiàn)牛牙釉柱
的理論依據(jù);瘜W(xué)法主要分為部分飽和酸緩沖脫礦 系統(tǒng)和酸性凝膠脫礦系統(tǒng)兩大類(lèi)。本實(shí)驗(yàn)就兩類(lèi)中 常用的兩種脫礦體系體外形成人工齲損的情況作一 比較,確定能形成病理學(xué)上更接近于自然齲的脫礦 體系。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示經(jīng)部分飽和的酸緩沖脫礦系 統(tǒng)所制備的人工齲損,用水(折射率=1.33)浸漬后, 偏光顯微鏡下觀察,可見(jiàn)明顯呈負(fù)性雙折射的表層
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擴(kuò)8。88匈 ¥研究動(dòng)態(tài)15
笆}坊{石、、蛤{#;\。
Considerations for determining optimal mouse caging density
Charmaine Fohz,DVMl,Larry ’PhD4,Pascalle Van
Carbone,DVM,,PhD2,David DeLong,DVM3,Bernard E.Rollin Loo,PhD5,Julia Whitaker,DVM6&Axel Wolff,DVM7
Division of Veterinary Resources,National Institutes of Health,Bethesda,MD.
2
University of
California San Francisco,San Francisco,CA.
3
Veterinary Medical Unit,VA Medical Center,Minneapolis,MN. Colorado State University,Fort Collins,CO. Utrecht
4
5
University,The Netherlands.
of Pathology and Laboratory Medicine,Division of
6
Department
Laboratory
Animal Medicine,University of North Carolina,Chapel Hill,NC.
7
Division of Compliance
Oversight,OLAW,National Institutes of Health,Bethesda,MD.
to
Correspondence should be addressed
Charmaine Fohz,DVM
At the 2006 National question of what guidelines
are
Meeting of the American Association of Laboratory Animal Science,a
or
panel discussed the that present
constitutes optimal
acceptable housing density for mice.Though there is
a
consensus
somewhat arbitrarily defined,scientific research has not yet been able to provide elear recommendations for explored the many factors that influence decisions
on
amending them.Speakers
mouse
housing,including
regulatory
requirements,scientific data and
their interpretation,financial considerations
and
ethical concerns.The panel largely
agreed that animal well-?being should be the measure of interest in evaluating housing density and that well?-being includes
not
only physical health,but also animals’behavior,productivity and preference.Lab Animal
2007,36(10)
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