本文關(guān)鍵詞：PrLZ基因3′-UTR區(qū)熒光素酶報(bào)告基因載體的構(gòu)建及活性檢測(cè)

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【摘要】：目的分析前列腺亮氨酸拉鏈(PrLZ)基因3′非編碼區(qū)(3′-UTR)可能的微小RNA(miRNA)調(diào)控位點(diǎn),構(gòu)建PrLZ基因3′-UTR熒光素酶報(bào)告載體,為研究PrLZ基因轉(zhuǎn)錄后的miRNA調(diào)控提供有效的工具。方法使用PCR方法從PrLZ陽性的C4-2細(xì)胞中擴(kuò)增含PrLZ基因3′-UTR區(qū)序列,插入到T-Vector載體上,提高PCR產(chǎn)物的連接、克隆效率,通過Xbal和BamHI限制性內(nèi)切酶雙酶切后將其連入經(jīng)相同內(nèi)切酶雙酶切后的熒光素酶報(bào)告基因載體pLUC中,構(gòu)建pLUC-PrLZ 3′-UTR載體,使用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)PrLZ基因3′-UTR可能是miR-34a的作用靶點(diǎn),使用慢病毒載體構(gòu)建對(duì)照載體(質(zhì)粒名稱-NC)和過表達(dá)miR-34a(質(zhì)粒名稱-miR-34a),包裝成病毒顆粒后分別感染293-T細(xì)胞,然后通過X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑將pLUC空質(zhì)粒和pLUC-PrLZ 3′-UTR重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染293-T細(xì)胞,Promega試劑盒測(cè)定熒光素酶的活性。結(jié)果得到含PrLZ基因3′-UTR序列的熒光素酶報(bào)告重組質(zhì)粒,并用凝膠電泳和基因測(cè)序的方法驗(yàn)證了其序列的正確性。在miR-34a高表達(dá)組的293-T細(xì)胞中,重組質(zhì)粒組熒光素酶活性比空質(zhì)粒組低40%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建PrLZ基因3′-UTR熒光素酶報(bào)告載體,miR-34a可以顯著降低熒光素酶的活性,PrLZ基因3′-UTR上可能有miR-34a的調(diào)控作用靶點(diǎn)。
【作者單位】： 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科;
【基金】：國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(No.2012CB518305)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 前列腺亮氨酸拉鏈(prostate leucine zipper,PrLZ)基因是WANG等[1]應(yīng)用cDNA文庫差異篩選的方法,從前列腺癌(prostate cancer,PCa)細(xì)胞LN-CaP/C4-2模型克隆出的具有前列腺癌組織相對(duì)特異性的新基因,臨床標(biāo)本分析證明該基因在前列腺高度增生組織和前列腺癌組織中高表達(dá),在正常前

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 袁軍;朱辰;趙虎;曹強(qiáng);秦超;邵鵬飛;華立新;殷長(zhǎng)軍;;miR-152對(duì)前列腺癌細(xì)胞株遷移和侵襲能力的影響[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2013年06期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張棟;李磊;張林琳;薛艷;王新陽;賀大林;;過表達(dá)PrLZ對(duì)前列腺癌LNCaP細(xì)胞體外侵襲潛能的影響[J];癌癥;2009年05期

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本文編號(hào)：1207760