本文關鍵詞：PrLZ基因3′-UTR區(qū)熒光素酶報告基因載體的構建及活性檢測

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【摘要】：目的分析前列腺亮氨酸拉鏈(PrLZ)基因3′非編碼區(qū)(3′-UTR)可能的微小RNA(miRNA)調控位點,構建PrLZ基因3′-UTR熒光素酶報告載體,為研究PrLZ基因轉錄后的miRNA調控提供有效的工具。方法使用PCR方法從PrLZ陽性的C4-2細胞中擴增含PrLZ基因3′-UTR區(qū)序列,插入到T-Vector載體上,提高PCR產物的連接、克隆效率,通過Xbal和BamHI限制性內切酶雙酶切后將其連入經相同內切酶雙酶切后的熒光素酶報告基因載體pLUC中,構建pLUC-PrLZ 3′-UTR載體,使用生物信息學方法預測PrLZ基因3′-UTR可能是miR-34a的作用靶點,使用慢病毒載體構建對照載體(質粒名稱-NC)和過表達miR-34a(質粒名稱-miR-34a),包裝成病毒顆粒后分別感染293-T細胞,然后通過X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent轉染試劑將pLUC空質粒和pLUC-PrLZ 3′-UTR重組質粒分別轉染293-T細胞,Promega試劑盒測定熒光素酶的活性。結果得到含PrLZ基因3′-UTR序列的熒光素酶報告重組質粒,并用凝膠電泳和基因測序的方法驗證了其序列的正確性。在miR-34a高表達組的293-T細胞中,重組質粒組熒光素酶活性比空質粒組低40%,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論成功構建PrLZ基因3′-UTR熒光素酶報告載體,miR-34a可以顯著降低熒光素酶的活性,PrLZ基因3′-UTR上可能有miR-34a的調控作用靶點。
【作者單位】： 西安交通大學第一附屬醫(yī)院泌尿外科;
【基金】：國家重點基礎研究發(fā)展計劃(No.2012CB518305)
【分類號】：R346
【正文快照】： 前列腺亮氨酸拉鏈(prostate leucine zipper,PrLZ)基因是WANG等[1]應用cDNA文庫差異篩選的方法,從前列腺癌(prostate cancer,PCa)細胞LN-CaP/C4-2模型克隆出的具有前列腺癌組織相對特異性的新基因,臨床標本分析證明該基因在前列腺高度增生組織和前列腺癌組織中高表達,在正常前

【參考文獻】

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1 袁軍;朱辰;趙虎;曹強;秦超;邵鵬飛;華立新;殷長軍;;miR-152對前列腺癌細胞株遷移和侵襲能力的影響[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2013年06期

【相似文獻】

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本文編號：1207760