本文關(guān)鍵詞：脂質(zhì)體RNAiMAX介導(dǎo)siRNA轉(zhuǎn)染沉默星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4基因

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【摘要】：目的明確脂質(zhì)體RNAiMAX(lipofectamine RNAiMAX)是否可以介導(dǎo)小干擾RNA(siRNA)轉(zhuǎn)染入原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞并實(shí)現(xiàn)水通道蛋白4(AQP4)基因沉默。方法利用原代培養(yǎng)的Wistar大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞,通過倒置熒光顯微鏡和Tecan酶標(biāo)儀,觀察lipofectamine RNAiMAX是否能介導(dǎo)Cy3標(biāo)記的siRNA轉(zhuǎn)染入細(xì)胞內(nèi),以及RNAiMAX濃度和siRNA濃度對轉(zhuǎn)染效率的影響;利用Real-time PCR方法檢測AQP4 siRNA轉(zhuǎn)染的基因沉默效果。結(jié)果倒置熒光顯微鏡和Tecan酶標(biāo)儀檢測發(fā)現(xiàn),隨著siRNA和RNAiMAX濃度的增加,轉(zhuǎn)染細(xì)胞熒光強(qiáng)度隨之增加(n=6);Real-time PCR檢測結(jié)果顯示,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA以及6ml/L RNAiMAX和60nmol/L AQP4 siRNA轉(zhuǎn)染星形膠質(zhì)細(xì)胞24h、48h、72h時,AQP4 mRNA水平均降低80%以上(n=6)。結(jié)論 Lipofectamine RNAiMAX可以介導(dǎo)siRNA轉(zhuǎn)染入原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞中并實(shí)現(xiàn)AQP4基因的沉默,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA即可達(dá)到理想的沉默效果。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)北京市神經(jīng)外科研究所病理生理學(xué)室;北德克薩斯大學(xué)健康科學(xué)中心藥理學(xué)與神經(jīng)科學(xué)系;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81271286) 北京市衛(wèi)生系統(tǒng)高層次衛(wèi)生技術(shù)人才培養(yǎng)計(jì)劃資助項(xiàng)目(2009-3-23)
【分類號】：R393
【正文快照】： 星形膠質(zhì)細(xì)胞是腦水腫發(fā)生時出現(xiàn)腫脹的主要細(xì)胞類型[1]。水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)主要表達(dá)于星形膠質(zhì)細(xì)胞足突,可以介導(dǎo)水分子及小分子物質(zhì)跨細(xì)胞膜主動轉(zhuǎn)運(yùn),與腦水腫發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2]。研究AQP4在腦水腫時星形膠質(zhì)細(xì)胞腫脹中的作用需要一種有效抑制AQP4基因表達(dá)的

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1199755