本文關(guān)鍵詞：人腫瘤壞死因子受體-Fc融合蛋白的表達(dá)及生物活性分析

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【摘要】：目的構(gòu)建攜帶人腫瘤壞死因子受體(TNFR)胞外區(qū)融合人IgG Fc片段的重組腺相關(guān)病毒載體(pAAV/hTNFR-Fc),并對融合蛋白hTNFR-Fc的表達(dá)和生物學(xué)活性進(jìn)行鑒定。方法構(gòu)建hTNFR-Fc融合基因重組腺相關(guān)病毒(AAV)載體,體外轉(zhuǎn)染人胚腎HEK293T細(xì)胞,收集轉(zhuǎn)染上清,以Western blot法檢測目的蛋白的表達(dá),應(yīng)用L929細(xì)胞測定重組表達(dá)產(chǎn)物對人和大鼠TNF-α細(xì)胞毒中和活性,采用ELISA比較重組表達(dá)產(chǎn)物對人和大鼠TNF-α的結(jié)合活性。結(jié)果成功構(gòu)建重組表達(dá)載體pAAV/hTNFR-Fc,在轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清中檢測到目的蛋白hTNFR-Fc的表達(dá),重組表達(dá)產(chǎn)物可有效結(jié)合人TNF-α并中和其L929細(xì)胞毒活性,并對大鼠TNF-α具有一定程度的結(jié)合和中和活性。結(jié)論成功構(gòu)建了hTNFR-Fc融合基因,驗證了其在AAV載體上的分泌性表達(dá),并對其生物活性進(jìn)行了鑒定,為進(jìn)一步病毒包裝和大鼠關(guān)節(jié)炎動物實驗研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究室;
【基金】：北京市自然科學(xué)基金資助項目(7132145)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎為主要病理特征的慢性自身免疫病,多種促炎因素導(dǎo)致關(guān)節(jié)滑膜組織異常增生,并可造成關(guān)節(jié)軟骨和骨的破壞[1-2]。在RA發(fā)病機制中,腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)被認(rèn)為是最重要的促炎細(xì)胞因子之一,可

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4 廖富

本文編號：1186173