本文關(guān)鍵詞：小鼠干細(xì)胞成骨和成軟骨分化特異性微小RNA的初步研究

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【摘要】：目的通過(guò)對(duì)C3H10T1/2細(xì)胞進(jìn)行成骨及成軟骨分化,利用微小RNA(microRNA,miRNA)芯片技術(shù)篩選成骨分化和成軟骨分化中差異miRNA,以期尋找調(diào)節(jié)C3H10T1/2細(xì)胞成骨及成軟骨分化的特異性miRNA。方法取C3H10T1/2細(xì)胞系,分別行成骨和成軟骨誘導(dǎo)分化,對(duì)誘導(dǎo)組和對(duì)照組進(jìn)行鑒定。然后通過(guò)miRNA芯片技術(shù)篩選分化前后2倍變化幅度且平均標(biāo)準(zhǔn)化信號(hào)值2的差異miRNA,并行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time fl uorescence quantitative PCR,RT-qPCR)驗(yàn)證。結(jié)果誘導(dǎo)7 d成骨誘導(dǎo)組較對(duì)照組有明顯ALP表達(dá)(P0.05);誘導(dǎo)7、14、21 d,RT-qPCR檢測(cè)成骨誘導(dǎo)組成骨標(biāo)志物Runx2、絲氨酸蛋白酶7(serine protease 7,Sp7)、Ⅰ型膠原、骨橋蛋白(osteopontin,OPN)mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于誘導(dǎo)0 d時(shí)(P0.05);誘導(dǎo)21 d,Western blot檢測(cè)成骨誘導(dǎo)組Runx2、Sp7、Ⅰ型膠原、OPN蛋白表達(dá)量明顯高于對(duì)照組(P0.05)。成軟骨誘導(dǎo)5、10、15 d,RT-qPCR檢測(cè)成軟骨誘導(dǎo)組軟骨標(biāo)志物SOX9、Ⅱ型膠原、蛋白多糖(Aggrecan)、透明質(zhì)酸合成酶(Has2)mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于誘導(dǎo)0 d時(shí)(P0.05);誘導(dǎo)15 d,Western blot檢測(cè)成軟骨誘導(dǎo)組SOX9、Ⅱ型膠原、Aggrecan、Has2蛋白表達(dá)量明顯高于對(duì)照組(P0.05)。通過(guò)miRNA芯片技術(shù)分別篩選出10個(gè)成骨和3個(gè)成軟骨2倍變化幅度且平均標(biāo)準(zhǔn)化信號(hào)值2的差異miRNA。除miR-455-3p之外,其余差異miRNA驗(yàn)證結(jié)果與芯片結(jié)果比較有較好一致性。結(jié)論通過(guò)miRNA芯片技術(shù)對(duì)C3H10T1/2細(xì)胞系以及其誘導(dǎo)成骨和成軟骨分化細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比,發(fā)現(xiàn)部分miRNA表達(dá)量在誘導(dǎo)后細(xì)胞中發(fā)生變化,為進(jìn)一步挑選成骨和成軟骨特異性miRNA進(jìn)行功能驗(yàn)證和靶基因預(yù)測(cè)奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院骨科;四川大學(xué)華西醫(yī)院生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·干細(xì)胞與組織工程研究室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81171731、30700837)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【正文快照】： 微小RNA(microRNA,miRNA)是真核生物中一類(lèi)長(zhǎng)度為19~23個(gè)核苷酸的小分子非編碼RNA,其對(duì)靶基因的調(diào)控表現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄后水平上,通過(guò)對(duì)靶基因mRNA的切割或?qū)ζ浞g抑制這兩種機(jī)制來(lái)下調(diào)靶基因的表達(dá)。研究表明,miRNA參與調(diào)控生物發(fā)育、細(xì)胞分化、增殖、凋亡和代謝多種功能,全基因組mi

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2 張?jiān)迄i;白希壯;孫羽;;BMP-14與bFGF聯(lián)合誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨分化的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年12期

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