本文關鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細胞生物特性比較:胰酶冷消化和組織塊法體外培養(yǎng)

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【摘要】：背景:以往采用胰酶冷消化法培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細胞的研究較少。目的:比較兩種方法體外培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞的生物學特性。方法:采用胰酶冷消化法和組織塊法從人臍帶中分離、純化和傳代培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞,記錄首次出現(xiàn)貼壁細胞時間及原代培養(yǎng)周期,倒置相差顯微鏡觀察臍帶間充質(zhì)干細胞的形態(tài)及生長情況,制作第3代臍帶間充質(zhì)干細胞生長曲線,流式細胞儀分析檢測第3代臍帶間充質(zhì)干細胞表面標志的表達,第3代臍帶間充質(zhì)干細胞加入成神經(jīng)誘導培養(yǎng)基誘導分化第3天行熒光免疫化學染色檢測Nestin的表達。結(jié)果與結(jié)論:使用上述兩種方法均可獲得臍帶間充質(zhì)干細胞,胰酶冷消化法首次出現(xiàn)貼壁細胞時間早于組織塊法(P0.05);原代培養(yǎng)周期差異無顯著性意義(P0.05)。倒置相差顯微鏡下細胞均為貼壁生長,形態(tài)為成纖維細胞樣,但胰酶冷消化法培養(yǎng)的少數(shù)原代細胞呈多角形,不規(guī)則,細胞的體積較組織塊法大。組織塊法獲得第3代細胞的增殖速率顯著快于胰酶冷消化法,在進入對數(shù)生長期后各個時間點細胞數(shù)量差異有顯著性意義(P0.05)。兩種細胞具有均一的細胞表型,均表達CD29,CD105,不表達CD34,CD45。兩種方法培養(yǎng)出來的第3代臍帶間充質(zhì)干細胞經(jīng)誘導后,免疫熒光均顯示神經(jīng)干細胞特征性標志物nestin陽性表達。結(jié)果表明胰酶冷消化法與組織塊法均能培養(yǎng)出臍帶間充質(zhì)干細胞,但組織塊法更適合于此類細胞的培養(yǎng),對細胞的傷害更低。
【作者單位】： 新疆醫(yī)科大學第五附屬醫(yī)院骨科;
【基金】：新疆醫(yī)科大學科研創(chuàng)新基金項目(XJC2012117)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 文章亮點:1實驗創(chuàng)新性地采用胰酶冷消化法培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞,從細胞形態(tài)、生長曲線、細胞表面標記物及誘導分化能力4個方面與傳統(tǒng)組織塊法比較,為不同需求的科研工作者獲得較多的臍帶間充質(zhì)干細胞、更完整的細胞結(jié)構(gòu)及其功能以滿足實驗要求提供一些資料。2結(jié)果顯示組織塊

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