本文關(guān)鍵詞：人心肌肌鈣蛋白I 和I-C復(fù)合物的原核表達(dá)及抗cTnI單克隆抗體的制備

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【摘要】：目的:通過大腸桿菌BL21原核表達(dá)獲得能夠替代天然人源c Tn I的蛋白產(chǎn)物,并用于Balb/c小鼠免疫,制備出高特異性高親和力的抗人c Tn I的單克隆抗體,為后續(xù)檢測(cè)方法的建立奠定基礎(chǔ)。方法:人工合成目的基因c Tn I-linker-Tn C,針對(duì)單體蛋白c Tn I和c Tn C的目的基因分別設(shè)計(jì)引物,通過PCR方法獲得c Tn I和c Tn C的目的基因,然后分別構(gòu)建重組大腸桿菌BL21,可溶性表達(dá)目的蛋白c Tn I、c Tn C和c Tn I-linker-Tn C,純化鑒定后用c Tn I-linker-Tn C復(fù)合物和標(biāo)準(zhǔn)c Tn I蛋白單體免疫六周齡Balb/c小鼠,通過經(jīng)典的雜交瘤技術(shù)篩選分泌抗c Tn I單抗的陽性雜交瘤細(xì)胞株,制備腹水型單克隆抗體并鑒定。結(jié)果:成功的構(gòu)建了三種目的蛋白(c Tn I、c Tn C和c Tn I-linker-Tn C)的重組表達(dá)菌株BL21,并實(shí)現(xiàn)了高可溶性表達(dá),對(duì)重組表達(dá)的目的蛋白c Tn I、c Tn C和c Tn I-linker-Tn C進(jìn)行免疫原性鑒定,結(jié)果均具有很好的免疫原性,初步認(rèn)為可以替代天然人源c Tn I并用于后續(xù)免疫和檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)c Tn I蛋白單體免疫并經(jīng)細(xì)胞融合后成功的篩選到8株抗人c Tn I的陽性雜交瘤細(xì)胞株,其中6H7和4A8的腹水型單抗效價(jià)可達(dá)4萬。用原核表達(dá)的c Tn I-linker-Tn C免疫Balb/c小鼠,經(jīng)細(xì)胞融合后的融合率為100%且陽性率可達(dá)30%,且原始孔細(xì)胞上清OD值超過2.0的克隆株有18株,進(jìn)一步篩選工作正在進(jìn)行之中。結(jié)論:成功的實(shí)現(xiàn)了目的蛋白c Tn I、c Tn C和c Tn I-linker-Tn C的高可溶性原核表達(dá),且很好的保持了免疫原性,可以用于后續(xù)檢測(cè)和免疫,有望成為天然蛋白的替代物。成功的篩選到了抗人c Tn I的陽性雜交瘤細(xì)胞株,并為后續(xù)檢測(cè)方法的建立打下了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 朱學(xué)泰,謝溱,馬瑞君;單克隆抗體制備技術(shù)研究進(jìn)展[J];甘肅科技;2005年03期

2 吳慶;心肌標(biāo)志物的研究進(jìn)展及臨床應(yīng)用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);2003年06期

3 王忠誠(chéng),沈鈞樂,王強(qiáng),府偉靈;心肌肌鈣蛋白I的檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè));2004年04期

4 王蘭蘭,武永康,李立新;血清Troponin　I,CK-MBmass,Myoglobin在急性心肌梗塞診斷中的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J];華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年02期

5 傅華,曾智,黃鶴,張恒渝;心肌肌鈣蛋白I在充血性心力衰竭中的意義[J];四川醫(yī)學(xué);2002年03期

6 楊振華 ,潘柏申 ,許俊堂;中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)文件心肌損傷標(biāo)志物的應(yīng)用準(zhǔn)則[J];中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2002年03期

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本文編號(hào)：1156467