本文關(guān)鍵詞：荷瘤小鼠脾臟髓源抑制細(xì)胞的分選及鑒定

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【摘要】：目的研究荷瘤小鼠脾臟中髓源抑制細(xì)胞(myeloid derived suppresser-cell,MDSCs)的分選與鑒定方法。方法常規(guī)培養(yǎng)小鼠腎癌細(xì)胞(Renca細(xì)胞),于Balb/c小鼠皮下建立小鼠腎癌模型;分離小鼠脾臟制成單細(xì)胞懸液,磁珠分選Gr-1+CD11b+雙陽性的MDSCs;臺酚藍(lán)染色檢測細(xì)胞存活率;流式細(xì)胞儀(flow cytometry,FCM)測其細(xì)胞純度;顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài);免疫熒光測其表面Gr-1、CD11b熒光表達(dá)情況;RT-PCR檢測Cox2和Arg-1的m RNA的表達(dá)情況;小鼠皮下成瘤實驗觀察MDSCs促腫瘤生長。結(jié)果成功建立小鼠腎癌模型,磁珠分選后經(jīng)FCM檢測Gr-1+CD11b+雙陽性的MDSCs細(xì)胞可達(dá)92.3%,顯著高于分選前(P0.01);免疫熒光鑒定結(jié)果顯示:分選后的細(xì)胞形態(tài)完整,Gr-1和CD11b的熒光表達(dá)于細(xì)胞膜且2種熒光可以融合;RT-PCR檢測分選后的MDSCs細(xì)胞群的Cox2和Arg-1的m RNA相對表達(dá)量顯著高于分選前(P0.05);小鼠皮下成瘤觀察到MDSCs組與實驗對照組有顯著差異(P0.05)。結(jié)論用免疫磁珠從荷瘤小鼠脾臟中成功分選得到MDSCs,具有較高純度和良好的生物活性,為后續(xù)實驗提供了理想的細(xì)胞來源。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科;重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81272572)
【分類號】：R392
【正文快照】： 髓源抑制性細(xì)胞(myeloid derived suppresser-cells,MDSCs)是一群缺乏淋巴系標(biāo)志具有多方向分化潛能和免疫抑制功能的異質(zhì)性細(xì)胞,它包括未成熟樹突狀細(xì)胞(DCs)、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和其他早期分化階段的髓系細(xì)胞。MDSCs的共同特性是它們的髓系來源、未成熟狀態(tài)、對T細(xì)胞應(yīng)答的顯

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