本文關(guān)鍵詞：NRF-1基因真核慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)

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【摘要】：目的:構(gòu)建核呼吸因子-1(NRF-1)基因慢病毒表達(dá)載體并包裝成重組慢病毒顆粒,感染大鼠心肌細(xì)胞H9c2(2-1)后,篩選出穩(wěn)定上調(diào)表達(dá)NRF-1的大鼠心肌細(xì)胞H9c2(2-1)。方法:利用lipofectAMINE 2000試劑將pLenti6.3-NRF1-IRES2-EGFP質(zhì)粒與兩種包裝質(zhì)粒在293T細(xì)胞中包裝成重組慢病毒,收集病毒并測(cè)定滴度。用重組慢病毒感染大鼠心肌細(xì)胞H9c2(2-1),然后用殺稻瘟素(blasticidin)篩選轉(zhuǎn)染陽(yáng)性細(xì)胞。用PCR法鑒定靶細(xì)胞基因組中NRF-1基因序列,用QPCR測(cè)定轉(zhuǎn)染陽(yáng)性靶細(xì)胞中NRF-1基因表達(dá)量。結(jié)果:收集的重組慢病毒滴度為5.5×107TU/ml。轉(zhuǎn)染陽(yáng)性靶細(xì)胞在熒光顯微鏡下可見(jiàn)綠色熒光。PCR結(jié)果顯示,慢病毒攜帶NRF-1基因序列已插入靶細(xì)胞基因組。QPCR結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染陽(yáng)性靶細(xì)胞中NRF-1基因的表達(dá)量是對(duì)照組的2.25倍。結(jié)論:本研究成功地構(gòu)建NRF-1基因重組慢病毒表達(dá)載體,并在大鼠心肌細(xì)胞H9c2(2-1)中表達(dá),為進(jìn)一步上調(diào)NRF-1基因表達(dá)后心肌細(xì)胞能量代謝的研究提供了實(shí)驗(yàn)支持,并為心力衰竭能量代謝的基因治療奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國(guó)人民解放軍第五醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科;寧夏醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院;寧夏回族自治區(qū)醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所寧夏醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究中心;
【基金】：寧夏回族自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助(NZ03680) 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助(81360042)
【分類(lèi)號(hào)】：R346
【正文快照】： 心力衰竭(HF)是心血管疾病終末階段。伴隨世界人口老齡化加快,其發(fā)病率逐年增高。患者的人身健康及生活質(zhì)量嚴(yán)重受損。近年研究發(fā)現(xiàn)HF發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,涉及多個(gè)方面,較多研究表明,心肌能量代謝紊亂是其中較為重要的原因[1,2],但目前藥物治療的作用有限。NRF-1(nuclear respirator

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1 邵迪;PGC-1β調(diào)節(jié)小鼠C2C12細(xì)胞線(xiàn)粒體發(fā)生和大鼠肝細(xì)胞血紅素合成的機(jī)制研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

2 趙學(xué)艷;PGC-1a過(guò)表達(dá)在大鼠內(nèi)耳血管紋邊緣細(xì)胞mtDNA4834缺失突變擬老化模型中意義的研究[D];華中科技大學(xué);2012年

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1 佘慧鈺;參麥注射液對(duì)術(shù)前阿霉素化療乳腺癌裸鼠模型心肌保護(hù)作用的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1154304