本文關鍵詞：NRF-1基因真核慢病毒表達載體的構建及表達

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【摘要】：目的:構建核呼吸因子-1(NRF-1)基因慢病毒表達載體并包裝成重組慢病毒顆粒,感染大鼠心肌細胞H9c2(2-1)后,篩選出穩(wěn)定上調表達NRF-1的大鼠心肌細胞H9c2(2-1)。方法:利用lipofectAMINE 2000試劑將pLenti6.3-NRF1-IRES2-EGFP質粒與兩種包裝質粒在293T細胞中包裝成重組慢病毒,收集病毒并測定滴度。用重組慢病毒感染大鼠心肌細胞H9c2(2-1),然后用殺稻瘟素(blasticidin)篩選轉染陽性細胞。用PCR法鑒定靶細胞基因組中NRF-1基因序列,用QPCR測定轉染陽性靶細胞中NRF-1基因表達量。結果:收集的重組慢病毒滴度為5.5×107TU/ml。轉染陽性靶細胞在熒光顯微鏡下可見綠色熒光。PCR結果顯示,慢病毒攜帶NRF-1基因序列已插入靶細胞基因組。QPCR結果顯示,轉染陽性靶細胞中NRF-1基因的表達量是對照組的2.25倍。結論:本研究成功地構建NRF-1基因重組慢病毒表達載體,并在大鼠心肌細胞H9c2(2-1)中表達,為進一步上調NRF-1基因表達后心肌細胞能量代謝的研究提供了實驗支持,并為心力衰竭能量代謝的基因治療奠定了基礎。
【作者單位】： 中國人民解放軍第五醫(yī)院重癥醫(yī)學科;寧夏醫(yī)科大學檢驗學院;寧夏回族自治區(qū)醫(yī)學科學研究所寧夏醫(yī)科大學醫(yī)學科學技術研究中心;
【基金】：寧夏回族自治區(qū)自然科學基金項目資助(NZ03680) 國家自然科學基金項目資助(81360042)
【分類號】：R346
【正文快照】： 心力衰竭(HF)是心血管疾病終末階段。伴隨世界人口老齡化加快,其發(fā)病率逐年增高�；颊叩娜松斫】导吧钯|量嚴重受損。近年研究發(fā)現(xiàn)HF發(fā)病機制復雜,涉及多個方面,較多研究表明,心肌能量代謝紊亂是其中較為重要的原因[1,2],但目前藥物治療的作用有限。NRF-1(nuclear respirator

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1 邵迪;PGC-1β調節(jié)小鼠C2C12細胞線粒體發(fā)生和大鼠肝細胞血紅素合成的機制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2010年

2 趙學艷;PGC-1a過表達在大鼠內耳血管紋邊緣細胞mtDNA4834缺失突變擬老化模型中意義的研究[D];華中科技大學;2012年

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1 佘慧鈺;參麥注射液對術前阿霉素化療乳腺癌裸鼠模型心肌保護作用的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

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本文編號：1154304