本文關(guān)鍵詞：抗尖吻蝮蛇毒卵黃抗體的制備與純化及其中和活性研究

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【摘要】：抗毒血清是目前治療蛇傷的唯一特效藥,然而,其生產(chǎn)的高成本、低得率及引發(fā)諸多副作用(過(guò)敏性休克、致熱反應(yīng)及血清病等)等不足,使得尋找更理想的蛇毒解毒劑變得十分迫切。因卵黃抗體(Ig Y)具有生產(chǎn)成本低、產(chǎn)量高、安全性好等優(yōu)點(diǎn),成為開發(fā)新蛇毒解毒劑的重要研究對(duì)象,它被認(rèn)為是一種可能替代抗蛇毒血清的新型解毒劑。本研究通過(guò)免疫白來(lái)航雞,從其所產(chǎn)雞蛋中成功制備出抗尖吻蝮蛇毒Ig Y,并對(duì)其中和活性及口服可行性進(jìn)行了分析。獲得主要結(jié)論如下:①?gòu)某醮蚊庖呓Y(jié)束到第4周,抗尖吻蝮蛇毒Ig Y的活性逐漸增強(qiáng),在第4周達(dá)到最高水平并維持至免疫過(guò)程終止。雞血清抗體活性與Ig Y活性變化一致。②采用“辛酸-硫酸銨”法批量純化Ig Y,Ig Y的分子量為180k Da,其中輕鏈為25 k Da,重鏈為65 k Da,Ig Y的產(chǎn)量為101.66mg Ig Y/蛋。③間接ELISA法測(cè)定抗尖吻蝮蛇毒Ig Y的效價(jià)為1:80 000,免疫雙向擴(kuò)散測(cè)定其效價(jià)為1:16。④抗尖吻蝮蛇毒Ig Y能與白唇竹葉青及黑眉蝮蛇毒發(fā)生交叉反應(yīng),不能同眼鏡蛇及銀環(huán)蛇毒發(fā)生交叉反應(yīng)。尖吻蝮蛇毒可能與白唇竹葉青蛇毒或黑眉蝮蛇毒這類同屬一個(gè)亞科的蛇毒含有的共同抗原決定簇多,而與銀環(huán)蛇毒或眼鏡蛇毒這類來(lái)自于眼鏡蛇科的蛇毒含的共同抗原決定簇極少。⑤抗尖吻蝮蛇毒Ig Y能中和尖吻蝮蛇毒的PLA2活性、5’-核苷酸酶活性、透明質(zhì)酸酶活性、纖維蛋白原凝結(jié)活性、纖維蛋白水解活性、CK酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、水腫活性以及3×LD50蛇毒對(duì)小鼠的攻擊等,并且本身無(wú)酶活性及毒性。⑥抗蛇毒Ig Y是非有毒物類。采用ELISA及Western blot均未能從灌胃的小鼠血清中檢測(cè)到活性Ig Y。本研究成功制備出抗尖吻蝮蛇毒Ig Y,其中和能力強(qiáng),是一種極富前景的蛇毒解毒劑。但本文對(duì)Ig Y口服可行性的研究還不夠深入,有待進(jìn)一步論證。
【學(xué)位授予單位】：重慶師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1153099