發(fā)布時(shí)間：2017-11-07 13:01

  本文關(guān)鍵詞：小鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定

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【摘要】：目的:探討自小鼠骨髓分離培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPC)的方法及其鑒定和生物學(xué)特性。方法:密度梯度離心法分離獲取小鼠骨髓單核細(xì)胞,培養(yǎng)于EGM-2 SingleQuots培養(yǎng)液中,每天于倒置顯微鏡下觀察EPC的形態(tài)。應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光法、流式細(xì)胞技術(shù)鑒定EPC表面抗原標(biāo)志CD34、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-2(VEGFR-2),熒光顯微鏡檢測(cè)EPC吞噬DiI標(biāo)記的乙�；兔芏戎鞍�(DiI-AC-LDL)及結(jié)合FITC標(biāo)記的荊豆凝集素(FITC-UEA-lectin)功能。結(jié)果:早期EPC呈長(zhǎng)梭形,細(xì)胞群落可呈現(xiàn)線狀、管狀、網(wǎng)狀生長(zhǎng)狀態(tài),培養(yǎng)7 d后出現(xiàn)干細(xì)胞集落,并逐漸增多;培養(yǎng)3周后,細(xì)胞集落逐漸消失,細(xì)胞呈現(xiàn)鋪路石樣生長(zhǎng)狀態(tài)。培養(yǎng)獲得的EPC絕大部分可同時(shí)表達(dá)細(xì)胞表面標(biāo)記物CD34及VEGFR2,并具有吞噬DiI-AC-LDL及結(jié)合FITC-UEA-lectin功能。結(jié)論:自小鼠骨髓中分離、培養(yǎng)、純化EPC是一種方便、經(jīng)濟(jì)、高效的培養(yǎng)方法。通過該方法培養(yǎng)獲得的EPC增殖能力強(qiáng),數(shù)量充足,生物學(xué)特性穩(wěn)定。該方法對(duì)今后利用EPC進(jìn)行細(xì)胞移植治療的相關(guān)實(shí)驗(yàn)有著重要意義。
【作者單位】： 南京大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院南京軍區(qū)南京總醫(yī)院心胸外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助(81101723)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 血液循環(huán)是機(jī)體生命維持的重要保證。血管內(nèi)皮作為血液與周圍組織的分界,在血液循環(huán)的穩(wěn)定性的維持中起著非常重要的作用[1]。自1997年Asahara首次報(bào)道經(jīng)由外周血獲得內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitor cell,EPC)以來,EPC因其具有的強(qiáng)大增殖潛能及向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的特性,越

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