發(fā)布時(shí)間：2017-11-07 04:38

  本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞穿透肽Tat-LK15介導(dǎo)siRNA的轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞毒性研究

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【摘要】：通過與Lipofectamine TM RNAi MAX(Lipo)比較,探討細(xì)胞穿透肽Tat-LK15對(duì)人腎上皮細(xì)胞(human embryonic kidney 293T cells,293T)和大鼠視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cell line,RGC-5)轉(zhuǎn)染小干擾RNA(small interference RNA,si RNA)的效率和細(xì)胞毒性,為后期實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。以羧基熒光素(carboxyfluorescein,FAM)標(biāo)記的si RNA為報(bào)告基因,不同劑量的Tat-LK15(Tat-LK15組)和Lipo(Lipo組)為轉(zhuǎn)染試劑,分別轉(zhuǎn)染293T和RGC-5細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24 h后熒光顯微鏡觀察FAM熒光強(qiáng)度,計(jì)算轉(zhuǎn)染效率,并以CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞毒性。隨著Tat-LK15和Lipo劑量的增加,si RNA轉(zhuǎn)染效率逐漸提高。當(dāng)Tat-LK15與si RNA配比為2∶1(μg/μg)時(shí),RGC-5細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率達(dá)到最高((87.3±4.5)%),低于Lipo與si RNA配比為5∶1(μL/μg)時(shí)的最高轉(zhuǎn)染效率((96.2±3.2)%(P0.05));作用于293T細(xì)胞時(shí),兩轉(zhuǎn)染試劑的最高轉(zhuǎn)染效率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。轉(zhuǎn)染試劑劑量增加,Lipo細(xì)胞毒性顯著增加,而Tat-LK15毒性無明顯變化。轉(zhuǎn)染效率最高時(shí),Lipo(5μL)組293T和RGC-5的細(xì)胞存活率僅為((77.8±4.1)%,(73.4±7.7)%)顯著低于Tat-LK15(2∶1)組同種細(xì)胞的存活率((91.0±3.7)%,(90.0±6.1)%)(P0.05)。Tat-LK15可有效地轉(zhuǎn)染si RNA,細(xì)胞毒性低,安全性突出,有一定的應(yīng)用前景。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué);廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院麻醉科;中國人民解放軍第421醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81100817;81371233)
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： RNA干擾技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中已被廣泛應(yīng)用[1],而轉(zhuǎn)染試劑作為其關(guān)鍵因素一直得到大量關(guān)注。常用的小干擾RNA(si RNA)轉(zhuǎn)染方法有病毒載體法、陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)法和陽離子聚合物法[2,3]。病毒載體轉(zhuǎn)染效率高,但其制備過程復(fù)雜、價(jià)格昂貴,免疫原性和生物安全性問題也限制了它的

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