本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌agr基因敲除及其對(duì)膜泡毒力影響

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【摘要】：目的利用同源重組技術(shù)構(gòu)建金黃色葡萄球菌RN4220附屬基因調(diào)節(jié)系統(tǒng)(agr)的敲除株,探討agr基因缺失對(duì)金黃色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影響。方法分別擴(kuò)增agr基因的上下游同源臂,利用重疊PCR獲得agr基因上下游同源臂的融合片段,經(jīng)酶切后連接敲除載體PYT3,構(gòu)建同源重組質(zhì)粒pYT3::Δagr,電轉(zhuǎn)化至金黃色葡萄球菌RN4220,利用pYT3質(zhì)粒對(duì)溫度敏感的特點(diǎn)篩選agr缺失的突變株。分別制備野生菌RN4220和突變株RN4220::Δagr的膜泡,小鼠毒力實(shí)驗(yàn)觀察agr基因缺失后對(duì)金黃色葡萄球菌膜泡毒力的影響。結(jié)果同源重組質(zhì)粒pYT3::Δagr通過(guò)酶切鑒定證明構(gòu)建成功;經(jīng)PCR及DNA測(cè)序證實(shí)獲得金黃色葡萄球菌RN4220 agr缺失突變株,重組效率為5.6%;agr突變株與野生株相比,其分泌膜泡的毒力大大降低,72 h內(nèi)小鼠存活率為100%。結(jié)論 agr基因缺失后能夠顯著降低膜泡的毒力。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部微生物學(xué)教研室 重慶市微生物工程實(shí)驗(yàn)室;第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院急診科;
【關(guān)鍵詞】： 金黃色葡萄球菌 膜泡 同源重組 附屬基因調(diào)節(jié)系統(tǒng)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31270979) 國(guó)家重大科技專(zhuān)項(xiàng)(2012ZX09103301-038) 重慶市自然科學(xué)基金(CSTC2012jjA10066)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R378
【正文快照】： 細(xì)菌膜泡(membrane vesicles,MVs)是以出芽方式從細(xì)菌表面分泌的球形雙層膜結(jié)構(gòu),直徑20~200 nm,是細(xì)菌分泌胞外因子的重要機(jī)制之一[1]。MVs可攜帶細(xì)菌的多種成分,如細(xì)菌脂多糖、毒素、毒性酶、表面蛋白以及細(xì)菌的DNA,因此,致病菌產(chǎn)生的MVs往往具有一定的毒力,參與細(xì)菌的致病

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 唐俊妮;周銳;王紅寧;曾志光;;附屬基因調(diào)節(jié)子在葡萄球菌生物被膜形成與感染中的作用[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年11期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 李鵬;副豬嗜血桿菌分子流行病學(xué)及其OMP-P2基因抗原性與檢測(cè)技術(shù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 劉英玉;副豬嗜血桿菌耐藥性調(diào)查和耐藥機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 唐e，

本文編號(hào)：1123680