本文關鍵詞：單純皰疹病毒Ⅱ型gC2蛋白在CHO細胞中的表達、純化及其免疫活性

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【摘要】：目的在CHO細胞中表達單純皰疹病毒(herpes simplex virus,HSV)Ⅱ型gC2蛋白,純化后檢測其免疫活性。方法利用ANTHEWIN等軟件分析GenBank中HSVⅡ型gC2的氨基酸序列,篩選抗原表位富集、且親水性較好的蛋白胞外區(qū)片段,選擇真核和原核生物均偏愛的密碼子,通過OptimumGene軟件對基因進行序列優(yōu)化,化學合成全新的基因序列HSV2-gC2,PCR擴增后,插入pMCE5載體,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pMCE5-gC2,轉(zhuǎn)染至CHO細胞中進行真核表達。表達的重組gC2蛋白經(jīng)親和層析純化后,進行SDS-PAGE及Western blot鑒定。將純化的重組gC2蛋白分別于第0、2、4周經(jīng)腹腔免疫小鼠,以免疫PBS作為對照,采用間接ELISA法檢測免疫小鼠的血清抗體水平;酶聯(lián)免疫斑點試驗(ELISPOT)檢測免疫小鼠脾淋巴細胞分泌IFNγ(代表Th1細胞因子)和IL-4(代表Th2細胞因子)的細胞頻率。結(jié)果重組表達質(zhì)粒pMCE5-gC2經(jīng)菌落PCR、雙酶切(EcoRⅠ/NotⅠ)及測序證實構(gòu)建正確;純化的重組gC2蛋白相對分子質(zhì)量約為90 000,純度約為85%,濃度為40μg/ml,可與小鼠抗His單克隆抗體特異性結(jié)合;通過3次免疫,小鼠產(chǎn)生了高水平的血清抗體,與免疫前相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.001);免疫小鼠脾細胞經(jīng)特異性抗原刺激后,分泌IFNγ和IL-4的細胞頻率分別為(13.46±2.832)/106和(19.2±2.48)/106個細胞,均顯著高于對照組(P0.001)。結(jié)論在CHO細胞中表達了重組gC2蛋白,純化的蛋白能夠激發(fā)小鼠產(chǎn)生良好的體液免疫和細胞免疫應答,為進一步研制HSV亞單位疫苗奠定了基礎。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院生物化學與分子生物學系;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學研究所;中國藥科大學生命科學與技術學院;
【關鍵詞】： 單純皰疹病毒Ⅱ型 包膜蛋白C 中國倉鼠卵巢細胞 免疫活性
【基金】：國家863重大課題(2012AA02A405) 國家傳染病重大專項(2013zx10004804-003) 國家重大新藥創(chuàng)制課題(2014ZX09304314-003) 國家自然基金(81373109) 江蘇省自然基金課題(BK2012526) 江蘇省社會發(fā)展基金課題(BE2010603)資助
【分類號】：R373.11
【正文快照】： 單純皰疹病毒(herpers simplex virus,HSV)屬于皰疹病毒科α亞科,是人類感染的常見病毒之一。HSV根據(jù)血清型可分為Ⅰ型和Ⅱ型兩種,其中,Ⅰ型主要通過口面部感染,也通過性傳播[1],Ⅱ型主要通過性傳播[2-3],其中HSVⅡ型可通過產(chǎn)道傳染給新生兒,造成新生兒皰疹性腦膜炎[4],致新生

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 彭燕婷;樊尚榮;;生殖器皰疹的診斷和處理[J];國際婦產(chǎn)科學雜志;2011年06期

2 吳冬梅;;伐昔洛韋聯(lián)合胸腺肽腸溶片間歇療法預防復發(fā)性生殖器皰疹的療效觀察[J];安徽醫(yī)學;2013年08期

3 WU LianQiu;ZHANG XueMei;CHE YanChun;ZHANG Ying;TANG SongQing;LIAO Yun;NA RuiXiong;XIONG XiangLin;LIU LongDing;LI QiHan;;A cellular response protein induced during HSV-1 infection inhibits viral replication by interacting with ATF5[J];Science China(Life Sciences);2013年12期

4 畢建軍;楊慧蘭;樊建勇;張玲;;伐昔洛韋對頻發(fā)性生殖器皰疹的抑制療法[J];首都醫(yī)科大學學報;2011年06期

5 潘鴻輝;余雄濤;黃紀國;謝意珍;;食藥用菌抑制人免疫缺陷病毒、單純皰疹病毒及流感病毒功效研究進展[J];食用菌學報;2013年02期

6 于囡;王海桃;杜鵑;李榮;劉賽;;扇貝糖胺聚糖對感染HSV-Ⅰ小鼠免疫功能的影響研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2014年04期

7 夏利;劉升學;蒙堅;程培華;陳德華;黃熙;劉群英;羅婧瑩;孫文國;;亞臨床型生殖器皰疹脫排病毒及藥物干預的臨床研究[J];中國性科學;2013年08期

8 徐放;遇廣輝;王普;;抗HSV-2單鏈抗體和堿性磷酸酶融合蛋白的制備[J];浙江工業(yè)大學學報;2014年01期

9 王文卿;;流動人口的艾滋病風險:對感染率數(shù)據(jù)的系統(tǒng)回顧[J];中國性科學;2014年01期

10 王雅靜;郭東春;劉家森;王淑亞;原冬偉;姜騫;林歡;司昌德;曲連東;;鴨腸炎病毒糖蛋白gB-gD主要抗原域的串聯(lián)表達[J];中國獸醫(yī)雜志;2013年12期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李珉珉;酸酐修飾人血清白蛋白的抗病毒活性及安全性研究[D];南方醫(yī)科大學;2013年

2 范薇;鴨瘟病毒gD基因發(fā)現(xiàn)及重組蛋白應用研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2013年

3 孫昆峰;鴨瘟病毒gC基因疫苗在鴨體內(nèi)分布規(guī)律及gC、gE基因缺失株的構(gòu)建和生物學特性的初步研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 張玲;單純皰疹病毒感染的實驗室檢測及其抗病毒抑制療法的應用[D];南方醫(yī)科大學;2011年

2 袁俊杰;shRNA表達載體對HSV-2 ICP4基因的干擾效應[D];遵義醫(yī)學院;2013年

3 楊攀;HSV-1衣殼蛋白VP23多克隆抗體的制備以及PGG在大鼠體內(nèi)的藥代動力學研究[D];暨南大學;2013年

4 安麗輝;綜合醫(yī)院皮膚性病科門診1999-2011年HIV和梅毒流行狀況及危險因素分析[D];昆明醫(yī)科大學;2013年

5 遇廣輝;構(gòu)建和表達抗HSV-2單鏈抗體和堿性磷酸酶的融合蛋白[D];浙江工業(yè)大學;2013年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉小朋,陳紫榕,張國安,魏國志,施水蘭;鑒定胸腺激素免疫活性的新方法[J];免疫學雜志;1996年04期

2 周梅仙;張紅琳;;抑制素α片段(1-26)辣根過氧化物酶標記物的制備與鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2007年07期

3 屠振力;施美星;;造血器官機能障礙對家蠶存活性能的影響[J];農(nóng)業(yè)生物技術學報;2007年03期

4 潘群興;王永山;劉潔;夏興霞;何孔旺;張雪寒;;腸出血性大腸桿菌O157∶H7 rfbE與fliC基因的表達及鑒定[J];江蘇農(nóng)業(yè)學報;2009年03期

5 吳廣楓;王姣斐;李平蘭;;改性雙歧桿菌胞外多糖體外免疫活性研究[J];食品科技;2011年02期

6 虞研原;丁仁瑞;;胸腺素與胸腺肽對免疫活性低下小鼠胸腺細胞增殖反應的比較研究[J];中國生化藥物雜志;1989年03期

7 吳國慶;李在連;田登安;武風堂;;乙型肝炎特異性轉(zhuǎn)移因子抗原特異免疫活性的檢測[J];濰坊醫(yī)學院學報;1993年04期

8 王宇宏,高航,倪維華,霍得勝,臺桂香;短棒狀桿菌有效成分的分離及其作用[J];中國生物制品學雜志;2005年05期

9 王大燕;王健偉;王彥斌;魏強;屈建國;洪濤;;輪狀病毒NSP4基因在非復制型腺病毒載體中的表達及免疫活性[J];世界華人消化雜志;2006年09期

10 蔡桂紅;李玉英;張政;王轉(zhuǎn)花;;TBa過敏原表位區(qū)段的融合表達及免疫活性分析[J];食品科學;2006年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 任曉霞;張政;蔡桂紅;李玉英;王轉(zhuǎn)花;;TBa過敏原表位區(qū)段的表達及免疫活性分析[A];2010年中國藥學大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

2 施理;張亞歷;張振書;張萬岱;周殿元;;基因重組H.pylori尿素酶A或B亞單位生物活性、免疫活性檢測[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學會第十二次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2000年

3 銀梅;日穆德瑪;王鳳龍;王選年;王新華;;雞腫瘤壞死因子的提取及其免疫活性的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)病理學分會第十一次獸醫(yī)病理學、第十次動物病理生理學學術研討會論文集[C];2001年

4 任曉霞;張政;蔡桂紅;李玉英;王轉(zhuǎn)花;;TBa過敏原表位區(qū)段的表達及免疫活性分析[A];2009年中國藥學大會暨第九屆中國藥師周論文集[C];2009年

5 楊慧蘭;王捷;楊靜;楊太成;劉榮卿;;單純皰疹病毒Ⅱ型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗免疫豚鼠的評價[A];2001年中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術會議論文匯編[C];2001年

6 李莉;吳英松;寧云山;李妍;李明;;惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶的純化及免疫活性鑒定[A];中國動物學會原生動物學分會第十二次學術討論會論文摘要匯編[C];2003年

7 翁幼竹;方永強;宋海霞;;E_2和SST與文昌魚內(nèi)柱生長的相關性[A];第二屆中國動物學會比較內(nèi)分泌學分會和發(fā)育生物學分會聯(lián)合學術研討會論文集[C];2005年

8 周洲;吳移謀;劉R，

本文編號：1115209