本文關(guān)鍵詞：小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化血管內(nèi)皮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討體外小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mBMMSCs)的分離培養(yǎng)對其定向誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞(VECs)的可行性。方法采用全骨髓貼壁法,分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外純化培養(yǎng)并傳代,倒置顯微鏡觀察原代細(xì)胞形態(tài)變化,采用生長曲線法及3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑藍(lán)(MTT)法觀察傳代細(xì)胞生長特性。采用第3代mBMMSCs在內(nèi)皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基(EBM-2)中以血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)進(jìn)行定向誘導(dǎo),觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;流式細(xì)胞儀分析比較第3代mBMMSCs及誘導(dǎo)后細(xì)胞DNA周期、細(xì)胞免疫表型的變化;免疫細(xì)胞熒光技術(shù)分別檢測CD31、vWF和CD34表達(dá)及攝取Di-lac-LDL結(jié)合FITC-UEA-1的功能特點(diǎn);體外血管形成實(shí)驗(yàn)檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。結(jié)果 mBMMSCs原代培養(yǎng)呈長梭形、漩渦狀排列生長,P1、P2、P3細(xì)胞生長曲線及MTT法顯示呈潛伏期、對數(shù)生長期及平臺期生長。誘導(dǎo)后的部分細(xì)胞形態(tài)可見類似血管內(nèi)皮樣改變,呈多角形、短梭形、鋪路石樣排列生長;細(xì)胞周期分析顯示,第3代mBMMSCs G0/G1期為86%,誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞G0/G1期為92%,細(xì)胞DNA周期無明顯差異;第3代mBMMSCs免疫表型結(jié)果顯示為CD105、CD90、CD73、CD44陽性表達(dá),而CD34、CD45、VEGF(CD309)、CD14陰性表達(dá);誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞VEGF(CD309)、CD34弱陽性表達(dá),而CD105、CD90、CD73、CD44、CD45、CD14陰性表達(dá);細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測第3代mBMMSCs表面CD31、vWF和CD34陰性表達(dá),不具有攝取Dil-ac-LDL、結(jié)合FITC-UEA-1的功能特點(diǎn)及形成血管管腔樣結(jié)構(gòu);誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達(dá)VECs特異性表面標(biāo)志CD31、vWF和CD34,具有攝取Di-lac-LDL、結(jié)合FITC-UEA-1的功能特點(diǎn)及體外可形成血管管腔樣結(jié)構(gòu)。結(jié)論采用全骨髓貼壁法培養(yǎng)的mBMMSCs在體外具有定向誘導(dǎo)分化為VECs的潛能,成為血管組織工程理想的細(xì)胞來源。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院北京市心肺血管疾病研究所分子生物學(xué)研究室;北京市心肺血管疾病研究所實(shí)驗(yàn)中心;首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院心外科;
【關(guān)鍵詞】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 血管內(nèi)皮細(xì)胞 誘導(dǎo)分化 小鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號:81370228) 省部共建重點(diǎn)教育部心血管重塑相關(guān)疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(編號:110267) 北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號:7072012) 北京市優(yōu)秀人才培養(yǎng)資助項(xiàng)目(編號:2012D003034000009)
【分類號】：R329
【正文快照】： 血管移植技術(shù)已廣泛應(yīng)用于心血管疾病、腫瘤、創(chuàng)傷、器官移植再造及顯微外科手術(shù)中[1]。自體血管其組織相容性好、無免疫排異反應(yīng),是最為理想的血管移植物,但由于患者常合并有血管疾病,缺乏可供移植的自體血管,因此,其臨床應(yīng)用受到限制[2]。組織工程化血管構(gòu)建與功能研究已成

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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【二級參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1104413