本文關(guān)鍵詞：重組人神經(jīng)生長(zhǎng)因子的高效表達(dá)和生物活性評(píng)價(jià)研究

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【摘要】：目的利用中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary,CHO)細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng),獲得高產(chǎn)的人神經(jīng)生長(zhǎng)因子(recombinant human Nerve Growth Factor,rhNGF)表達(dá)細(xì)胞株并對(duì)其分泌的rhNGF生物學(xué)活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法設(shè)計(jì)、合成并構(gòu)建了攜帶rhNGF目的基因的GS-DHFR雙基因篩選表達(dá)載體pDG2.0/NGF。經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其導(dǎo)入二氫葉酸還原酶缺陷型中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO DG44)中,經(jīng)氨甲喋呤(MTX)和蛋氨酸亞氨基代砜(MSX)兩種藥物加壓篩選和克隆化獲得目的細(xì)胞株。經(jīng)過(guò)陽(yáng)離子交換和分子篩純化,獲得rhNGF制品。最后,利用小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子生物學(xué)活性參比品評(píng)估純化制品的生物學(xué)活性。結(jié)果通過(guò)基因合成、載體構(gòu)建、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、加壓篩選和克隆化等步驟,我們得到了高表達(dá)rhNGF的CHO-DG44單克隆細(xì)胞株。經(jīng)過(guò)2步法純化獲得了純度大于98%的精制rhNGF制品。生物學(xué)活性分析表明,與市售小鼠NGF產(chǎn)品相比較,我們所表達(dá)的rhNGF具有更好的生物學(xué)活性。結(jié)論成功實(shí)現(xiàn)了rhNGF的高水平和高活性表達(dá),為大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)重組人神經(jīng)生長(zhǎng)因子奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京華安科創(chuàng)生物技術(shù)有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 重組人神經(jīng)生長(zhǎng)因子 CHO細(xì)胞 表達(dá) 生物活性
【基金】：海淀區(qū)科技專項(xiàng)計(jì)劃資助(項(xiàng)目編號(hào)K20100115C)
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 目前市場(chǎng)上極度缺乏特異性的腦和神經(jīng)保護(hù)劑類藥物,此類藥物也是研發(fā)難度極大的藥物之一。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)是最早被發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素家族的成員之一,它對(duì)交感神經(jīng)、中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化及再生和功能特性的表達(dá)均具有重要的

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1091752