本文關(guān)鍵詞：重組人神經(jīng)生長因子的高效表達和生物活性評價研究

  更多相關(guān)文章： 重組人神經(jīng)生長因子 CHO細胞 表達 生物活性

【摘要】：目的利用中國倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary,CHO)細胞真核表達系統(tǒng),獲得高產(chǎn)的人神經(jīng)生長因子(recombinant human Nerve Growth Factor,rhNGF)表達細胞株并對其分泌的rhNGF生物學(xué)活性進行評價。方法設(shè)計、合成并構(gòu)建了攜帶rhNGF目的基因的GS-DHFR雙基因篩選表達載體pDG2.0/NGF。經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其導(dǎo)入二氫葉酸還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞(CHO DG44)中,經(jīng)氨甲喋呤(MTX)和蛋氨酸亞氨基代砜(MSX)兩種藥物加壓篩選和克隆化獲得目的細胞株。經(jīng)過陽離子交換和分子篩純化,獲得rhNGF制品。最后,利用小鼠神經(jīng)生長因子生物學(xué)活性參比品評估純化制品的生物學(xué)活性。結(jié)果通過基因合成、載體構(gòu)建、細胞轉(zhuǎn)染、加壓篩選和克隆化等步驟,我們得到了高表達rhNGF的CHO-DG44單克隆細胞株。經(jīng)過2步法純化獲得了純度大于98%的精制rhNGF制品。生物學(xué)活性分析表明,與市售小鼠NGF產(chǎn)品相比較,我們所表達的rhNGF具有更好的生物學(xué)活性。結(jié)論成功實現(xiàn)了rhNGF的高水平和高活性表達,為大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)重組人神經(jīng)生長因子奠定了堅實基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京華安科創(chuàng)生物技術(shù)有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 重組人神經(jīng)生長因子 CHO細胞 表達 生物活性
【基金】：海淀區(qū)科技專項計劃資助(項目編號K20100115C)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 目前市場上極度缺乏特異性的腦和神經(jīng)保護劑類藥物,此類藥物也是研發(fā)難度極大的藥物之一。神經(jīng)生長因子(nerve growth factor,NGF)是最早被發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)營養(yǎng)素家族的成員之一,它對交感神經(jīng)、中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的生長、發(fā)育、分化及再生和功能特性的表達均具有重要的

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙強,俞萍,柳川,王會信;NGF體外生物學(xué)活性的定量測定方法[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;1998年02期

2 熊華花,胡瓊?cè)A,李泉水;神經(jīng)生長因子與周圍神經(jīng)再生[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年04期

3 孫劍瑞;楊波;杜英;宋來君;關(guān)方霞;胡祥;胡平生;徐虹;王云龍;;神經(jīng)生長因子對神經(jīng)干細胞增殖的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2006年02期

4 路曉淼;王恩群;;神經(jīng)生長因子對骨髓基質(zhì)細胞成骨分化影響的研究進展[J];安徽醫(yī)藥;2009年02期

5 袁瑞紅;劉流;趙德萍;徐宏慧;孫家平;王福科;劉垠;;神經(jīng)生長因子對瘢痕成纖維細胞影響的實驗研究[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2010年02期

6 于肇英;;神經(jīng)生長因子的研究[J];生理科學(xué)進展;1988年03期

7 王學(xué)銘;;神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)的基因編碼一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生經(jīng)濟分冊);1988年06期

8 范靈芝，陳蕙，，楊新科，劉彥仿;外周血中腦源性神經(jīng)生長因子的克隆[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;1995年02期

9 諶宏鳴,吳良芳,保天然,周雪;小鼠神經(jīng)生長因子的細胞內(nèi)免疫組織化學(xué)陽性反應(yīng)定位[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2000年04期

10 尹元琴,任常山;人神經(jīng)生長因子cDNA的體外擴增[J];中國公共衛(wèi)生;2001年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王婷婷;姜彥多;;神經(jīng)生長因子對運動神經(jīng)元保護作用的定量研究[A];面向二十一世紀的生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)和軍事病理學(xué)論文摘要匯編[C];2000年

2 賈占峰;張海林;;神經(jīng)生長因子對大鼠交感神經(jīng)元鈉離子通道的雙重作用[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)會議暨學(xué)會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

3 井緒東;陳麗;張洹;;誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞表達神經(jīng)膽堿乙�；D(zhuǎn)移酶[A];第11次中國實驗血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

4 吳佐泉;邱煒;丁繼兵;肖同浩;;神經(jīng)生長因子預(yù)防大鼠額葉皮質(zhì)損傷后基底前腦膽堿能神經(jīng)元變性[A];2001年全國中西醫(yī)結(jié)合急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

5 蔣應(yīng)明;陳國友;盧琳;安華章;張意;曹雪濤;;炎性因子對人樹突狀細胞表達神經(jīng)生長因子及其受體的調(diào)控作用及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

6 劉曉柳;李光千;趙小明;范玉華;殷樹儀;;大鼠心內(nèi)神經(jīng)節(jié)細胞神經(jīng)生長因子的表達[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

7 陳素蘭;姜志鋼;趙建剛;吳愛菊;徐蘭珍;郝靜;;人胚骨骼肌中促運動神經(jīng)生長因子的分離及生物效應(yīng)分析[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

8 劉佳梅;王秀力;陳東;;PC12細胞向神經(jīng)元誘導(dǎo)分化的實驗研究[A];2007年中國解剖學(xué)會第十屆全國組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2007年

9 段文卓;宮海民;孫曉東;金光香;劉俊平;;MAP激酶信號系統(tǒng)對PC12細胞端粒酶和分化的影響[A];第六屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會論文摘要集[C];2007年

10 薛斌;溫傳俊;;hNRAGE破壞E-cadherin／β-catenin介導(dǎo)的細胞之間的黏附[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會2005年學(xué)術(shù)大會、青年學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 孫洪濤;世界首個神經(jīng)生長因子產(chǎn)品獲國家批準[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

2 ;神經(jīng)受損凍干NGF有特效[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 方琳;激活素A促進雞胚背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)突起生長作用及其機制研究[D];吉林大學(xué);2008年

2 蔣應(yīng)明;炎性因子對人樹突狀細胞表達神經(jīng)生長因子及其受體的調(diào)控作用及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

3 徐學(xué)武;重組低毒腺病毒表達的beta-內(nèi)啡肽對CCI大鼠治療作用的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 姚兵;大鼠消化道GnRH受體的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

5 李俊峰;神經(jīng)生長因子及p75~(NTR)蛋白對肝細胞生物學(xué)作用的初步研究[D];暨南大學(xué);2012年

6 譚濤;低頻rTMS增強Aβ模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

7 郝帥;紫杉醇和神經(jīng)生長因子在嗅感覺神經(jīng)元分化過程中的作用[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 烏優(yōu)圖;神經(jīng)生長因子（NGF）對神經(jīng)干細胞的分化以及對神經(jīng)元軸突形成的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

2 夏智群;NGF和BDNF在炎性痛大鼠背根神經(jīng)節(jié)和脊髓角的表達[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

3 孫凌聰;己二酮誘導(dǎo)PC12細胞中毒模型的建立及神經(jīng)生長因子的保護作用[D];武漢大學(xué);2005年

4 費良健;雪旺細胞體外分離培養(yǎng)及甲基強地松龍對雪旺細胞分泌功能影響的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

5 周瓊;NGF體外誘導(dǎo)hMSCs分化為神經(jīng)元樣細胞[D];南華大學(xué);2008年

6 萬瑤;P物質(zhì)與神經(jīng)生長因子對正常人外周血中NK細胞殺傷活性的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

7 鹿文靜;CGRP對HaCaT細胞增殖和凋亡及分泌NGF的影響[D];青島大學(xué);2008年

8 貝俊杰;M電流調(diào)節(jié)與大鼠SCG神經(jīng)元興奮性的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

9 楊向東;神經(jīng)生長因子促進辣椒素誘導(dǎo)的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元P物質(zhì)的釋放[D];山東大學(xué);2008年

10 白艷艷;人β-NGF基因在大腸桿菌與倉鼠卵巢細胞中的表達[D];蘇州大學(xué);2002年

本文編號：1091752