本文關(guān)鍵詞：細(xì)粒棘球絳蟲組織蛋白酶B的重組表達(dá)及生物信息學(xué)分析

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【摘要】：目的克隆、表達(dá)細(xì)粒棘球絳蟲組織蛋白酶B(Eg Cat B)基因,并對其進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測和分析。方法提取細(xì)粒棘球絳蟲總RNA反轉(zhuǎn)錄成c DNA,以此為模板擴(kuò)增目的基因。利用無縫克隆技術(shù)和麥胚無細(xì)胞表達(dá)體系克隆表達(dá)Eg Cat B,用免疫印跡實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。采用Signal P 4.1、TMHMM sever v.2.0、Target P 1.1對Eg Cat B編碼蛋白分別進(jìn)行信號肽、跨膜區(qū)及亞細(xì)胞定位的預(yù)測。采用BLASTP和Gene Doc進(jìn)行Eg Cat B同源序列比對及保守位點(diǎn)分析。采用Prot Param、SMART、Predictprotein、Swiss-model分析Eg Cat B編碼蛋白的結(jié)構(gòu)。采用Net OGlyc 4.0 Server和Net NGlyc 1.0 Server在線分析Eg Cat B蛋白O型和N型糖基化位點(diǎn)。結(jié)果成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒p EU-Eg Cat B。蛋白電泳和免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該基因獲得了可溶性表達(dá)。經(jīng)生物信息學(xué)分析預(yù)測該蛋白分子量35.9 k Da、理論等電點(diǎn)6.37,為含信號肽的分泌蛋白,酶活性位點(diǎn)高度保守,并通過Gln106、Cys112、His282和Asn302形成了催化中心。Eg Cat B基因所編碼蛋白氨基酸序列中不存在N-糖基化位點(diǎn),但存在9個O-糖基化位點(diǎn)。結(jié)論成功克隆表達(dá)了細(xì)粒棘球絳蟲Eg Cat B基因并對其進(jìn)行了較全面的生物信息學(xué)預(yù)測分析,為該蛋白的功能研究提供了參考依據(jù)。
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所 衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 世界衛(wèi)生組織瘧疾、血吸蟲病和絲蟲病合作中心;內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)粒棘球絳蟲 組織蛋白酶B 無縫克隆 無細(xì)胞體系 生物信息學(xué)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81201315) 中國疾病預(yù)防控制中心青年基金(2013A103) 上海市衛(wèi)生局科研課題(20124174) 上海市自然科學(xué)基金(13ZR1462800)
【分類號】：R383.33
【正文快照】： tion for further functional study of the Eg Cat B protein.囊型包蟲病(Cyst echinococcosis,CE)是由細(xì)粒棘球絳蟲(Echinococcus granulosus)的幼蟲(棘球蚴)寄生于人、畜體內(nèi)所引起的危害嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病,是世界包蟲病的主要疾病負(fù)擔(dān)[1]。我國囊型包蟲病流行區(qū)主要

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【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李s，

本文編號：1089235