本文關(guān)鍵詞：棘阿米巴原蟲全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建

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【摘要】：目的快速構(gòu)建棘阿米巴滋養(yǎng)體全長(zhǎng)cDNA文庫(kù),為棘阿米巴滋養(yǎng)體抗原的篩選和基因結(jié)構(gòu)研究奠定基礎(chǔ)。方法以棘阿米巴滋養(yǎng)體分離株總RNA為模板,以經(jīng)修飾的SMART寡聚核苷酸引物逆轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA,采用長(zhǎng)距PCR(long-Distance PCR,LD PCR)方法擴(kuò)增得到雙鏈cDNA,經(jīng)蛋白酶K消化和SfiⅠ酶切后通過(guò)色譜柱CHROMA SPON-400按分子質(zhì)量進(jìn)行分離,進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定,回收純化0.4~2.5kb分離產(chǎn)物。取1μl PCR產(chǎn)物與λ噬菌體連接,以XL1-BLUE為受體菌擴(kuò)增得到cDNA文庫(kù),分別用梯度法和隨機(jī)測(cè)序法檢測(cè)文庫(kù)滴度與重組率。結(jié)果成功構(gòu)建棘阿米巴cDNA文庫(kù),文庫(kù)滴度為3.85×107pfu/ml,插入片段大小在0.4~2.5kb之間,重組率為100%(20/20)。結(jié)論棘阿米巴滋養(yǎng)cDNA文庫(kù)構(gòu)建成功,為棘阿米巴滋養(yǎng)體抗原的篩選和基因結(jié)構(gòu)研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 吉林醫(yī)藥學(xué)院病原學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 棘阿米巴 cDNA文庫(kù) RNA穩(wěn)定劑
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金課題(No.81301450) 吉林省教育廳課題(吉教科合字No.2014373) 吉林省科技廳國(guó)際合作項(xiàng)目(No.20130413035GH)
【分類號(hào)】：R382.1
【正文快照】： 棘阿米巴原蟲(Acanthamoeba spp.)是廣泛分布于自然環(huán)境中的自由生活阿米巴,其中致病性棘阿米巴主要引起致盲性的棘阿米巴性角膜炎(Acanthamoebakeratitis,AK)和阿米巴性肉芽腫性腦炎或腦膜腦炎(granμlomatous amoebic encephalitis,GAE),尤其在免疫功能低下人群,其感染率逐

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【相似文獻(xiàn)】

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1 錢e

本文編號(hào)：1062479