本文關(guān)鍵詞：甲型副傷寒沙門菌噬菌體的分離及其生物學特性的分析

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【摘要】：目的分離甲型副傷寒沙門菌(副甲菌)噬菌體(副甲噬菌體),并分析其生物學特性。方法從昆明某醫(yī)院污水中分離副甲噬菌體,并采用噬斑形成法檢測其滴度;透射電鏡下觀察濃縮純化后的副甲噬菌體形態(tài);分析副甲噬菌體對不同pH(1~12)和不同溫度(40、50、60、70、80℃)作用的敏感性;培養(yǎng)副甲菌和副甲噬菌體,以不同培養(yǎng)時間為橫坐標,對應(yīng)的噬菌體滴度為縱坐標,繪制一步生長曲線,并測定爆發(fā)量、最佳MOI及副甲菌突變率;提取副甲噬菌體基因組,酶切分析副甲噬菌體核酸,SDS-PAGE分析副甲噬菌體外殼蛋白;采用熱酚法提取脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),采用苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)法提取外膜蛋白(outer membrane protein,OMP),初步分析副甲噬菌體的受體。結(jié)果在醫(yī)院的污水中分離出的副甲噬菌體,經(jīng)雙層平板計數(shù)可見大小不一、透明的噬斑,滴度在109~1010 PFU之間,透射電鏡觀察可見長尾和一個頭部;副甲噬菌體在pH值3~10之間滴度較高,40℃以上,隨溫度上升滴度明顯降低,在80℃幾乎無活性副甲噬菌體存在;副甲噬菌體感染潛伏期為20 min,爆發(fā)期為50 min,爆發(fā)量129,最佳MOI為0.2,副甲菌突變率為5.8×10-7~2.2×10-6;副甲噬菌體基因組的單酶切產(chǎn)物均可見33 bp的特異條帶,SDS-PAGE分析可見4條主帶;LPS、OMP能與副甲噬菌體結(jié)合,是副甲噬菌體的受體。結(jié)論副甲噬菌體為長尾噬菌體,基因組為dsDNA,大小為33 bp,最佳MOI為0.2,受體位點為LPS和OMP。
【作者單位】： 昆明理工大學醫(yī)學院;成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 沙門菌 甲型副傷寒 細菌噬菌體 生物學特性
【基金】：國家自然科學基金項目(31160193) 云南省教育廳科學研究基金項目(2010Y398) 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究面上項目(2010ZC055;2012FB135)
【分類號】：R378
【正文快照】： 噬菌體又稱細菌病毒,是生物圈中最多的微生物,在微生物平衡及生物多態(tài)性等方面均具有重要作用。副甲菌是甲型副傷寒的病原菌,通過糞口途徑傳播。人群對副甲菌普遍易感,尤以兒童和青壯年發(fā)病率最高。每年全球傷寒患者約2 200萬,其中由副甲菌引起的約500萬[1]。在我國尤其是在廣

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本文編號：1062460