發(fā)布時(shí)間：2017-10-18 13:49

  本文關(guān)鍵詞：檢測(cè)肺孢子菌巢式PCR方法的建立及其敏感性和特異性研究

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【摘要】：目的建立檢測(cè)肺孢子菌基因的特異性mtLSU巢式PCR方法,研究其在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺孢子菌感染模型的檢測(cè)效果及其敏感性和特異性,以期為臨床提供檢測(cè)肺孢子菌定植或感染的新方法。方法依據(jù)肺孢子菌線粒體大亞基保守序列設(shè)計(jì)巢式PCR內(nèi)、外引物,建立并優(yōu)化檢測(cè)肺孢子菌基因的巢式PCR體系。以免疫抑制誘導(dǎo)肺孢子菌感染大鼠模型為檢測(cè)對(duì)象,比較mtLSU巢式PCR與六亞甲基四胺銀(GMS)染色法檢測(cè)肺孢子菌的陽性率及符合率。對(duì)陽性標(biāo)本進(jìn)行DNA純化,構(gòu)建分子克隆,采用倍比稀釋法檢測(cè)mtLSU巢式PCR的敏感性;以呼吸道感染常見的8種病原體(光滑假絲酵母菌、近平滑假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌、白色念珠菌、克柔假絲酵母菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、支原體)為對(duì)照,檢測(cè)方法的特異性。結(jié)果肺印片GMS染色鏡檢實(shí)驗(yàn)組大鼠,14只查到肺孢子菌包囊,檢出率為70.0%(14/20),對(duì)照組檢出率為0(0/20)。用mtLSU巢式PCR均能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組大鼠肺孢子菌基因,陽性率為100%(20/20),對(duì)照組均為陰性。mtLSU巢式PCR法陽性率與GMS染色法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。敏感性檢驗(yàn)結(jié)果表明,mtLSU巢式PCR檢測(cè)最小量為366fg的肺孢子菌基因。特異性檢測(cè)顯示,其他8種呼吸道常見病原體的mtLSU巢式PCR的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。結(jié)論成功建立了檢測(cè)肺孢子菌基因的mtLSU巢式PCR方法,動(dòng)物模型檢測(cè)結(jié)果表明該方法的敏感性高、特異性強(qiáng),有望應(yīng)用于臨床患者標(biāo)本中肺孢子菌的基因檢測(cè)。
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物教研室;中國醫(yī)科大學(xué)附屬一院呼吸疾病研究所;
【關(guān)鍵詞】： mtLSU巢式PCR 肺孢子菌 敏感性 特異性
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81370189) 遼寧省科技廳自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2011225020)
【分類號(hào)】：R379.9
【正文快照】： 由肺孢子菌(Pneumocystis)感染導(dǎo)致的肺孢子菌肺炎(pneumocystis pneumonia,PCP)是免疫力低下人群最常見的并發(fā)病和主要致死原因[1]。近年來,伴隨著艾滋病患者在發(fā)展中國家的不斷增加和其他免疫功能低下或者免疫缺陷人群,諸如器官移植受者、原發(fā)性免疫缺陷患者、接受免疫抑制

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1055286