發(fā)布時(shí)間：2017-10-17 07:32

  本文關(guān)鍵詞：鼠源抗人IgE單克隆抗體的制備及功能鑒定

  更多相關(guān)文章： 人IgE 雜交瘤 單克隆抗體

【摘要】：目的通過制備小鼠抗人IgE單克隆抗體,為過敏性疾病診斷及研制具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的人源化抗人IgE單克隆抗體打下基礎(chǔ)。方法以CRL8033細(xì)胞的cDNA為模板擴(kuò)增人IgE Fcε3-4段基因序列并將其連接到pET-32a(+)載體中,轉(zhuǎn)化BL21(DE3)大腸桿菌并進(jìn)行表達(dá)。然后將表達(dá)所得包涵體進(jìn)行變復(fù)性,通過SDS-PAGE驗(yàn)證純度。最后將純化的融合蛋白作為抗原免疫BALB/c小鼠,經(jīng)三次免疫后取小鼠脾臟細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞融合來制備雜交瘤。用ELISA篩選出能結(jié)合人IgE蛋白的陽性克隆,并以ELISA、Western Blot及免疫熒光等手段對抗人IgE單克隆抗體的特異性進(jìn)行鑒定。最后使用擴(kuò)增鼠源抗體可變區(qū)的通用引物擴(kuò)增雜交瘤細(xì)胞株3H4和6A10中抗人IgE抗體輕重鏈可變區(qū)的編碼基因,并通過蛋白預(yù)測軟件對擴(kuò)增所得的輕重鏈可變區(qū)的氨基酸序列進(jìn)行分析。結(jié)果成功構(gòu)建pET32a(+)-IgE Fcε3-4載體并完成人IgE Fcε3-4融合蛋白的純化。用該蛋白作為免疫原免疫小鼠,細(xì)胞融合后經(jīng)篩選得到兩株雜交瘤細(xì)胞株,分別為3H4和6A10,其分泌的單克隆抗體均可特異性地識(shí)別人IgE蛋白,可用于ELISA、Western Blot及免疫熒光等手段對人IgE的檢測。最后,借助蛋白分析軟件得到單克隆抗體3H4和6A10可變區(qū)氨基酸序列。結(jié)論成功獲得了可用于特異性檢測人IgE蛋白的單克隆抗體,為人IgE的檢測及研制具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗人IgE單克隆抗體奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：人IgE 雜交瘤 單克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392.11
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-8
• 英文縮略語8-9
• 前言9-11
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法11-29
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-36
• 討論36-38
• 結(jié)論38-39
• 本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 附錄43-56
• 一、文獻(xiàn)綜述43-53
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 二、在學(xué)期間的科研成績53-54
• 三、致謝54-55
• 四、個(gè)人簡介55-56

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 段薇,張健,鄭劍玲,蘇丹,王美慧;抗呼吸道合胞病毒單克隆抗體的研制[J];微生物學(xué)雜志;2004年05期

2 張唯敏;;新單克隆抗體已應(yīng)用于臨床[J];國外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊);1986年04期

3 遲素敏;;單克隆抗體的制備和鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1986年Z1期

4 張明杰;單克隆抗體在農(nóng)業(yè)中有何用途?[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1991年02期

5 孫國鳳;;單克隆抗體藥品在日本通過調(diào)查會(huì)[J];生物技術(shù)通報(bào);1991年09期

6 ;一種制備單克隆抗體的更有效而經(jīng)濟(jì)的方法[J];國外醫(yī)學(xué)(臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊);1998年05期

7 任新玲,沈麗英,金伯泉,井曉梅,王睿;表皮生長因子受體單克隆抗體抗肺癌作用的研究[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年03期

8 章波,陳惠鵬,范國才,陳吉中,王清明;抗人肝再生增強(qiáng)因子單克隆抗體的研制[J];免疫學(xué)雜志;2000年06期

9 李鳳英,陳名道,顧衛(wèi)瓊,陳春榮,唐金鳳;人瘦素單克隆抗體的鑒定[J];放射免疫學(xué)雜志;2000年02期

10 陳志南,蔣建利;單克隆抗體——從鼠到人[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2000年03期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐爽;安萬新;胡榮花;葉萍;孟祥昱;;不同方法收集單克隆抗體濃縮后的比較[A];中國輸血1999年年會(huì)暨紀(jì)念A(yù)BO血型發(fā)現(xiàn)100周年學(xué)術(shù)交流論文專輯[C];1999年

2 劉大維;高斌;;狂犬病毒單克隆抗體的研制[A];2010年中國科學(xué)院微生物研究所博士后學(xué)術(shù)年會(huì)暨第二屆博誼論壇論文摘要集[C];2011年

3 陳炅;;治療性單克隆抗體的作用靶點(diǎn)及臨床應(yīng)用[A];2013年中國臨床藥學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨第九屆臨床藥師論壇論文集[C];2013年

4 徐爽;徐焱;;單克隆抗體在輸血領(lǐng)域的應(yīng)用探討[A];中國輸血1999年年會(huì)暨紀(jì)念A(yù)BO血型發(fā)現(xiàn)100周年學(xué)術(shù)交流論文專輯[C];1999年

5 彭虹;舒翠麗;劉永全;王華;高杰英;;抗人α4單克隆抗體的制備和鑒定[A];中國免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

6 祭芳;史建榮;陳正賢;徐劍宏;陸瓊嫻;;抗脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單克隆抗體的制備[A];中國植物病理學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

7 張光波;董秋明;於葛華;李文香;張學(xué)光;;一株鼠抗人4-1BB單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能的鑒定[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

8 張錦超;楊金菊;吳瓊;李戩;陳勇;李輝;宋穎博;羅曉彤;任飛;高媛;杜雪梅;鞠艷芳;王兆卿;王京蘭;徐菡;柳曉蘭;崔玉芳;錢小紅;賀福初;高建恩;孫啟鴻;;高效鑒定單克隆抗體所識(shí)別未知抗原技術(shù)平臺(tái)的建立及應(yīng)用[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要論文集[C];2004年

9 楊永昌;王北寧;賴春寧;黎燕;;抗血小板單克隆抗體重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的表達(dá)[A];第五次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 孫效;高新;尚明美;宋海峰;湯仲明;;抗胰高血糖素樣肽單克隆抗體的制備[A];第八次全國藥物與化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 尹暉;單克隆抗體研發(fā)進(jìn)入新階段[N];無錫日報(bào);2010年

2 編譯 李勇;單克隆抗體：生物類似藥開發(fā)的秘鑰[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2014年

3 廣凱;單克隆抗體藥物將有大發(fā)展[N];中國醫(yī)藥報(bào);2000年

4 ;單克隆抗體應(yīng)用前景看好[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

5 黃東臨;羅氏叱咤單克隆抗體市場[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

6 ;單克隆抗體異軍突起[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2003年

7 尹暉;全球最大單克隆抗體研制基地落戶無錫[N];中國醫(yī)藥報(bào);2010年

8 尹暉;最大單克隆抗體研制項(xiàng)目在馬山奠基[N];無錫日報(bào);2010年

9 數(shù)文;羅氏買進(jìn)抗癌單克隆抗體[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

10 毛文波;單克隆抗體：征服癌癥的新方法[N];科技日報(bào);2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 魏德強(qiáng);以植物病毒為載體建立新型的載體—半抗原免疫體系[D];東北林業(yè)大學(xué);2014年

2 王璞;以CD146為靶點(diǎn)的胃癌早期診斷多功能納米探針的相關(guān)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 張瀟;抗EV71病毒單克隆抗體及柯薩奇病毒病毒樣顆粒的制備研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2015年

4 鄒年莉;雞傳染性支氣管炎病毒Sczy3 S1蛋白中和性單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 程林;人△42PD1特異性單克隆抗體的制備及其免疫功能的初步探討[D];南京大學(xué);2014年

6 王海;直腸癌上調(diào)表達(dá)蛋白eEF2單克隆抗體制備及臨床應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2016年

7 孫佳善;禽流感、新城疫和犬瘟熱病毒單克隆抗體篩選策略比較及應(yīng)用研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 胡新韜;HIV-1B'和CRF07_BC慢性感染者中和抗體應(yīng)答特征及CD4bs抗原特異性單克隆抗體分離鑒定初步研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2012年

9 白宇;馬γ-干擾素單克隆抗體的制備及細(xì)胞免疫評價(jià)方法的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

10 余自強(qiáng);抗血小板膠原受體糖蛋白VI單克隆抗體的制備和功能研究[D];蘇州大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王曉磊;流行性乙型腦炎病毒單克隆抗體的制備與prM-E蛋白抗原捕獲ELISA檢測方法的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 葛新杰;NT-proBNP單克隆抗體的研制及ELISA定量檢測方法的建立[D];鄭州大學(xué);2015年

3 奉彬;基于鴨疫里炠氏桿菌表面抗原D15的乳膠凝集試驗(yàn)方法建立及其單克隆抗體的制備[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 李劍;抗TRPM2兔單克隆抗體制備及初步鑒定[D];浙江大學(xué);2016年

5 劉偉;胰腺炎型鴨1型甲肝病毒VP1蛋白單克隆抗體的制備[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

6 俞錦錦;抗伏馬菌素B_1單克隆抗體的制備及其ELISA檢測試劑盒的研發(fā)[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

7 郭淑音;一種小型切向流過濾器的設(shè)計(jì)與驗(yàn)證及切向流過濾器縮小/放大理論[D];華東理工大學(xué);2016年

8 應(yīng)蘭;豬白細(xì)胞介素22克隆表達(dá)和活性研究及單克隆抗體的制備[D];青海大學(xué);2016年

9 宋革;馬鈴薯S病毒和馬鈴薯Y病毒單克隆抗體的制備及應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2016年

10 彭言峰;牛血紅蛋白單克隆抗體的制備及其檢測試劑盒研制[D];吉林大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1047573