本文關(guān)鍵詞：Caveolin-1、CD147和MMP-2在小鼠下頜第一磨牙牙胚及成釉細(xì)胞系中表達(dá)的研究

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【摘要】：牙齒是胚胎時(shí)期牙源性上皮與顱神經(jīng)脊來源的牙源性間充質(zhì)相互誘導(dǎo)和作用的結(jié)果,大量信號分子參與其中構(gòu)成了復(fù)雜的信號網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng),對牙齒發(fā)育調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識將對牙組織工程學(xué)研究進(jìn)展起到?jīng)Q定性作用。細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是胞膜窖/窖蛋白-1(Caveolae/Caveolin-1)最重要的生理功能之一�；|(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)和細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)物(EMMPRIN/CD147)可能共同參與上皮組織和外胚間充質(zhì)之間基底膜的降解,使基底膜兩側(cè)的細(xì)胞相互接觸,傳遞信號,誘導(dǎo)牙齒硬組織的發(fā)育;有研究顯示CD147分子結(jié)構(gòu)在細(xì)胞外的2個(gè)免疫球蛋白區(qū)分別具有激活MMPs和結(jié)合Caveolin-1的活性。本課題組前期的免疫組化研究發(fā)現(xiàn):小鼠胚胎期E14.5、E16.5、E18.5天和出生后兩天(PN2)的下頜第一磨牙牙胚中均有Caveolin-1、CD147及MMP-2表達(dá),提示三者參與小鼠下頜第一磨牙牙胚的發(fā)育。但是,針對牙齒發(fā)育過程中釉質(zhì)形成細(xì)胞中Caveolae的形態(tài)學(xué)觀察及Caveolin-1、CD147和MMP-2之間的相互關(guān)系仍不清楚。目的1.觀察牙胚發(fā)育過程中牙胚上皮細(xì)胞Caveolae的形態(tài)學(xué)變化,為Caveolae/Caveolin-1在牙胚發(fā)育中的作用提供組織形態(tài)學(xué)參考。2.檢測不同發(fā)育階段的小鼠牙胚組織中Caveolin-1、CD147和MMP-2的m RNA表達(dá)水平,探討在牙胚發(fā)育過程中三者在轉(zhuǎn)錄水平的變化,為進(jìn)一步研究其在牙胚發(fā)育中的作用提供參考。3.體外沉默成釉細(xì)胞中Caveolin-1的表達(dá),檢測CD147和MMP-2表達(dá)量的變化,探討三者在成釉細(xì)胞中的調(diào)控關(guān)系,為進(jìn)一步研究牙胚釉質(zhì)發(fā)育過程中三者的調(diào)控關(guān)系奠定基礎(chǔ)。方法1.在體視顯微鏡下分離小鼠E14.5、E16.5、E18.5和PN2時(shí)期的下頜第一磨牙牙胚,采用常規(guī)電鏡及免疫電鏡方法觀察牙胚發(fā)育過程中釉質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)Caveolae的形態(tài)及位置變化。2.收集小鼠E14.5、E16.5、E18.5和PN2時(shí)期的下頜第一磨牙牙胚,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)定量檢測各階段牙胚組織中Caveolin-1、CD147、MMP-2的m RNA水平,并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3.采用Si RNA技術(shù)轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的成釉細(xì)胞,封閉Caveolin-1基因的表達(dá),實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及免疫印跡分析(western blot)檢測干擾效果,并檢測干擾之后成釉細(xì)胞中CD147和MMP-2的m RNA及蛋白水平的變化,并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1.常規(guī)電鏡及免疫電鏡結(jié)果顯示:在小鼠E14.5、E16.5、E18.5和PN2時(shí)期的下頜第一磨牙牙胚中釉質(zhì)形成細(xì)胞的細(xì)胞膜及胞質(zhì)內(nèi)均有Caveolae典型的凹陷樣結(jié)構(gòu)。2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示:小鼠E14.5、E16.5、E18.5和PN2時(shí)期的下頜第一磨牙牙胚中Caveolin-1 m RNA的表達(dá)量逐漸增加,CD147m RNA、MMP-2m RNA在蕾狀期至鐘狀早期的表達(dá)量沒有明顯變化,但在鐘狀后期表達(dá)量明顯增高。3.轉(zhuǎn)染成釉細(xì)胞之后,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測Caveolin-1m RNA和MMP-2m RNA的表達(dá)量明顯降低,CD147m RNA的表達(dá)量沒有明顯變化。western blot檢測Caveolin-1、高糖型CD147和MMP-2的蛋白表達(dá)量均降低。結(jié)論1.釉質(zhì)形成細(xì)胞的細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在Caveolae結(jié)構(gòu),且以獨(dú)立凹陷狀的形式參與成釉細(xì)胞的分化及釉質(zhì)的形成。2.Caveolin-1、CD147和MMP-2表達(dá)于發(fā)育中的牙胚組織中,提示三者參與牙胚發(fā)育過程。3.牙胚發(fā)育過程中Caveolin-1可能通過調(diào)節(jié)CD147的糖基化程度進(jìn)而影響MMP-2的產(chǎn)生。
【關(guān)鍵詞】：Caveolin-1 MMP-2 CD147 牙胚發(fā)育 成釉細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R333.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略詞表11-13
• 引言13-16
• 實(shí)驗(yàn)一 牙胚發(fā)育過程中胞膜窖的形態(tài)學(xué)觀察16-21
• 1 材料和方法16-18
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-19
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論19
• 4 實(shí)驗(yàn)討論19-21
• 實(shí)驗(yàn)二 Caveolin-1、CD147、MMP-2 的m RNA在牙胚組織中的定量表達(dá)21-29
• 1 材料與方法21-24
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論26
• 4 實(shí)驗(yàn)討論26-29
• 實(shí)驗(yàn)三 Caveolin-1 的表達(dá)對成釉細(xì)胞CD147、MMP-2 的影響29-43
• 1 材料與方法29-39
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-40
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論40-41
• 4 實(shí)驗(yàn)討論41-43
• 全文總結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 附圖48-54
• 綜述 Caveolae和Caveolin-1 的生物學(xué)結(jié)構(gòu)和功能的研究進(jìn)展54-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 個(gè)人簡歷62-63
• 致謝63-64

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本文編號：1036566