本文關(guān)鍵詞：弓形蟲抗原基因真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4的構(gòu)建

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【摘要】：目的構(gòu)建弓形蟲抗原基因真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4。方法根據(jù)弓形蟲RH標(biāo)準(zhǔn)株SAG1和SAG4基因序列分別設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物(分別含有HindⅢ/BamHⅠ和BamHⅠ/XbaⅠ內(nèi)切酶位點(diǎn)),PCR擴(kuò)增目的基因,并將這兩段基因分別克隆至PEGM-T Easy載體,經(jīng)菌落PCR和雙酶切鑒定;用HindⅢ/BamHⅠ和BamHⅠ/XbaⅠ分別雙酶切PEGM-T Easy-SAG1、PEGM-T Easy-SAG4和pVAX1,得到含內(nèi)切酶位點(diǎn)的SAG1和SAG4基因片段,分別與pVAX1連接,構(gòu)建pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4真核表達(dá)質(zhì)粒,經(jīng)菌落PCR和雙酶切鑒定。結(jié)果PCR擴(kuò)增得到目的基因SAG1和SAG4,測(cè)序結(jié)果分別與弓形蟲RH標(biāo)準(zhǔn)株SAG1和SAG4基因比較,符合率均為100%。構(gòu)建PEGM-T Easy-SAG1、PEGM-T Easy-SAG4克隆質(zhì)粒和pVAX1-SAG1、pVAX1-SAG4真核表達(dá)質(zhì)粒,分別經(jīng)菌落PCR和雙酶切鑒定,顯示722bp的SAG1基因片段和511bp的SAG4基因片段均插入載體PEGM-T Easy和pVAX1中。結(jié)論成功克隆了pVAX1-SAG1、pVAX1-SAG4真核表達(dá)質(zhì)粒,為弓形蟲基因疫苗應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)寄生蟲學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 弓形蟲 基因疫苗 真核表達(dá)質(zhì)粒
【基金】：廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(桂科攻10124001A-64)
【分類號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種重要的條件致病病原體,呈世界性分布,廣泛寄生于人體及其他動(dòng)物的有核細(xì)胞內(nèi),可引起嚴(yán)重的人獸共患弓形蟲病,為免疫功能抑制或缺陷者(如器官移植、惡性腫瘤及艾滋病人)致死的主要原因之一,且慢性期緩殖子的活化對(duì)免疫功能缺陷者有致命的危

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本文編號(hào)：1032613