本文關鍵詞：弓形蟲抗原基因真核表達質(zhì)粒pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4的構建

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【摘要】：目的構建弓形蟲抗原基因真核表達質(zhì)粒pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4。方法根據(jù)弓形蟲RH標準株SAG1和SAG4基因序列分別設計一對特異引物(分別含有HindⅢ/BamHⅠ和BamHⅠ/XbaⅠ內(nèi)切酶位點),PCR擴增目的基因,并將這兩段基因分別克隆至PEGM-T Easy載體,經(jīng)菌落PCR和雙酶切鑒定;用HindⅢ/BamHⅠ和BamHⅠ/XbaⅠ分別雙酶切PEGM-T Easy-SAG1、PEGM-T Easy-SAG4和pVAX1,得到含內(nèi)切酶位點的SAG1和SAG4基因片段,分別與pVAX1連接,構建pVAX1-SAG1和pVAX1-SAG4真核表達質(zhì)粒,經(jīng)菌落PCR和雙酶切鑒定。結(jié)果PCR擴增得到目的基因SAG1和SAG4,測序結(jié)果分別與弓形蟲RH標準株SAG1和SAG4基因比較,符合率均為100%。構建PEGM-T Easy-SAG1、PEGM-T Easy-SAG4克隆質(zhì)粒和pVAX1-SAG1、pVAX1-SAG4真核表達質(zhì)粒,分別經(jīng)菌落PCR和雙酶切鑒定,顯示722bp的SAG1基因片段和511bp的SAG4基因片段均插入載體PEGM-T Easy和pVAX1中。結(jié)論成功克隆了pVAX1-SAG1、pVAX1-SAG4真核表達質(zhì)粒,為弓形蟲基因疫苗應用研究奠定了基礎。
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學寄生蟲學教研室;
【關鍵詞】： 弓形蟲 基因疫苗 真核表達質(zhì)粒
【基金】：廣西科學研究與技術開發(fā)計劃項目(桂科攻10124001A-64)
【分類號】：R382.5
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種重要的條件致病病原體,呈世界性分布,廣泛寄生于人體及其他動物的有核細胞內(nèi),可引起嚴重的人獸共患弓形蟲病,為免疫功能抑制或缺陷者(如器官移植、惡性腫瘤及艾滋病人)致死的主要原因之一,且慢性期緩殖子的活化對免疫功能缺陷者有致命的危

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本文編號：1032613