本文關(guān)鍵詞：山奈酚通過調(diào)控FoxO通路抑制氧化應(yīng)激介導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡機(jī)制研究

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【摘要】：目的:在體外構(gòu)建氧化應(yīng)激環(huán)境,探討山奈酚(kaempferol)抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡的作用,并進(jìn)一步研究ROS/Fox O信號(hào)通路在過程中發(fā)揮的作用及其機(jī)制。方法:提取SPF級(jí)適齡健康SD大鼠骨髓,采用全骨髓貼壁法提取、培養(yǎng)、純化BMSCs并進(jìn)行擴(kuò)增,倒置相差顯微觀察細(xì)胞形態(tài)變化,運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)BMSCs表面標(biāo)志物。選擇第3代BMSCs隨機(jī)分成一下幾組:A:空白對(duì)照組、B:H2O2處理組、C:山奈酚處理組、D:山奈酚+H2O2組,CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞活力;利用流式細(xì)胞儀測(cè)定各組細(xì)胞凋亡情況及細(xì)胞內(nèi)活性氧水平;進(jìn)一步運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組抗氧化基因(CAT)和DNA損傷修復(fù)基因(Gadd45a)表達(dá)水平,Western blot檢測(cè)各組BMSCs中Fox O3a的表達(dá)。結(jié)果:對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察,3代細(xì)胞完全貼壁,形態(tài)為梭形或扁平形,均一,呈集落樣、緊密排列生長(zhǎng),符合SD大鼠BMSCs特征;實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知H2O2提高細(xì)胞氧化應(yīng)激水平而誘導(dǎo)BMSCs發(fā)生凋亡,細(xì)胞活力與H2O2濃度呈依賴關(guān)系且其降低程度隨H2O2濃度增加而增加,同時(shí)細(xì)胞凋亡明顯增加;山奈酚在選定的范圍濃度(2μM-10μM)預(yù)處理時(shí),對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒有抑制作用,還有適度的促進(jìn)細(xì)胞增殖,保護(hù)細(xì)胞的作用,但繼續(xù)加大環(huán)境中山奈酚濃度,顯示其逆轉(zhuǎn)效果無顯著變化。表明山奈酚能夠通過降低BMSCs氧化應(yīng)激水平發(fā)揮對(duì)抗凋亡的保護(hù)作用。與此同時(shí),與正常組相比,H2O2組誘導(dǎo)的BMSCs細(xì)胞活力明顯降低,凋亡率顯著增高,伴隨著細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基水平明顯增高,Fox O3a含量上調(diào),CAT基因和Gadd45a基因水平的表達(dá)量明顯增高,表現(xiàn)為生長(zhǎng)阻滯;山奈酚的加入,明顯降低上述蛋白及基因水平的表達(dá),抑制了BMSCs凋亡和ROS對(duì)細(xì)胞的毒害作用。結(jié)論:在體外構(gòu)建H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激狀態(tài)下,BMSCs表現(xiàn)出凋亡樣改變并與其環(huán)境濃度呈現(xiàn)一定的相關(guān)性;山奈酚通過抑制氧化應(yīng)激導(dǎo)致的BMSCs凋亡來發(fā)揮作用;山奈酚能下調(diào)ROS/Fox O信號(hào)途徑的表達(dá),引起后者轉(zhuǎn)錄抗氧化基因(CAT)和DNA損傷修復(fù)基因(Gadd45a)水平降低,從而保護(hù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞免受氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)旨在探討山奈酚對(duì)抗氧化應(yīng)激引起的凋亡的機(jī)理提供了一定的實(shí)驗(yàn)參考依據(jù),為干細(xì)胞移植聯(lián)合藥物來改善干細(xì)胞存活情況、提高移植修復(fù)效率提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：山奈酚 氧化應(yīng)激 過氧化氫 FoxO基因 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料與方法14-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-18
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑14-15
• 2.1.3 儀器及設(shè)備15-16
• 2.1.4 相關(guān)藥物藥劑的配制16-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-29
• 2.2.1 器材的準(zhǔn)備18
• 2.2.2 BMSCs的分離、培養(yǎng)、純化18-19
• 2.2.3 BMSCs相關(guān)鑒定19-20
• 2.2.4 H_2O_2凋亡濃度及時(shí)間選擇20
• 2.2.5 山奈酚適宜濃度及時(shí)間選擇20
• 2.2.6 實(shí)驗(yàn)分組20-21
• 2.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)21
• 2.2.8 RT-PCR及Western blot檢測(cè)21-28
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法28-29
• 第3章 結(jié)果29-38
• 3.1 BMSCs的形態(tài)學(xué)觀察與相關(guān)鑒定29-31
• 3.1.1 BMSCs的形態(tài)學(xué)觀察29
• 3.1.2 BMSCs生成曲線繪制29-30
• 3.1.3 BMSCs表面抗原鑒定30-31
• 3.2 不同濃度梯度下細(xì)胞活力比較31-33
• 3.2.1 H_2O_2對(duì)BMSCs活力的影響31-32
• 3.2.2 山奈酚對(duì)H_2O_2處理下BMSCs活力的影響32-33
• 3.3 各組流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)量結(jié)果33-35
• 3.3.1 各組細(xì)胞調(diào)亡率33-34
• 3.3.2 各組細(xì)胞活性氧水平34-35
• 3.4 RT-PCR及Western blot技術(shù)測(cè)量結(jié)果35-38
• 3.4.1 FoxO3a、CAT、Gadd45a表達(dá)水平35-36
• 3.4.2 FoxO3a蛋白表達(dá)量及分布36-38
• 第4章 討論38-41
• 4.1 BMSCs概述及特性38-39
• 4.2 氧化應(yīng)激與BMSCs凋亡39
• 4.3 山奈酚抗BMSCs氧化凋亡功能39-40
• 4.4 山奈酚與ROS/FoxO/CAT(Gadd45a）信號(hào)及BMSCs氧化凋亡40-41
• 第5章 結(jié)論與展望41-42
• 5.1 結(jié)論41
• 5.2 展望41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果47-48
• 綜述 活性氧誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展48-57
• 參考文獻(xiàn)54-57

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 張國(guó)文;王安萍;;熒光法研究中藥功能因子山奈酚與溶菌酶的相互作用[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(理科版);2009年01期

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5 王U，

本文編號(hào)：1023674