本文關(guān)鍵詞：粉塵螨全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及初步鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建粉塵螨全長(zhǎng)cDNA文庫(kù),為粉塵螨相關(guān)基因研究奠定基礎(chǔ)。方法用RNAiso Reagent試劑盒提取粉塵螨總RNA,然后以SMART IVTM Oligo-nucleotide和CDSIII/3'PCR Primer為引物,在反轉(zhuǎn)錄酶作用下合成cDNA第1鏈,利用LD-PCR方法合成cDNA第2鏈。合成的雙鏈cDNA經(jīng)蛋白酶K消化及SfiⅠ酶切,得到的cDNA克隆入λTripIEx2載體中,構(gòu)建粉塵螨全長(zhǎng)cDNA文庫(kù),測(cè)定分析文庫(kù)滴度及插入片段大小。結(jié)果成功構(gòu)建粉塵螨全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)。檢測(cè)cDNA文庫(kù)未擴(kuò)增時(shí)滴度為7.3×106pfu/ml,文庫(kù)擴(kuò)增后滴度為5.0×109pfu/ml,插入片段為0.5~2.5kb,平均1.2kb左右。結(jié)論成功構(gòu)建了高質(zhì)量的粉塵螨全長(zhǎng)cDNA表達(dá)文庫(kù),所建文庫(kù)容量及插入片段大小適用于對(duì)粉塵螨相關(guān)基因的進(jìn)一步研究。
【作者單位】： 鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 粉塵螨 cDNA文庫(kù) 構(gòu)建 鑒定
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.NS-FC31272369,NS-FC81001330) 江蘇省衛(wèi)生廳招標(biāo)項(xiàng)目(No.Q201310)
【分類號(hào)】：R384.4
【正文快照】： 粉塵螨(Dermatophagoides farinae)隸屬于蜱螨亞綱(55Acari)真螨總目(Acariformes)疥螨目(Sarcoptiformes)甲螨亞目(Oribatida)甲螨總股(Desmonomatides)無(wú)氣門(mén)股(Astigmatina)羽螨總科(Analgoidea)麥?zhǔn)瞅?Pyroglyphidae)塵螨亞科(Dermatophagoidinae)[1],廣泛存在于人類生

【參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1023661