本文關(guān)鍵詞：利用翻譯延伸因子1-α啟動(dòng)子在畢赤酵母中表達(dá)人乳頭瘤病毒16L1蛋白

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【摘要】：目的利用翻譯延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)啟動(dòng)子在畢赤酵母中表達(dá)人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法從畢赤酵母GS115中擴(kuò)增組成型TEF1-α啟動(dòng)子(PTEF1-α)基因,通過基因重組替換商業(yè)化表達(dá)質(zhì)粒pPink-HC和pPink-LC的啟動(dòng)子PAOX1;在PTEF1-α下游分別克隆綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;將重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化感受態(tài)畢赤酵母PichiaPink strain 1,培養(yǎng)不同時(shí)間后,熒光顯微鏡下觀察GFP的表達(dá);分別在YPD、YPG、YPM、YPSor培養(yǎng)基中培養(yǎng)pTEF-16 L1轉(zhuǎn)化菌,檢測菌體在不同培養(yǎng)基中的增殖情況;Western blot檢測HPV 16 L1蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果重組質(zhì)粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1經(jīng)雙酶切鑒定和序列分析表明構(gòu)建正確;熒光顯微鏡檢測顯示,在不同培養(yǎng)時(shí)間PTEF1-α指導(dǎo)了GFP的成功表達(dá),且表達(dá)量隨培養(yǎng)時(shí)間的延長而降低;重組畢赤酵母在YPD和YPG培養(yǎng)基中生長迅速;4種培養(yǎng)基中均有HPV 16 L1蛋白的特異性表達(dá),且在YPG和YPSor培養(yǎng)基中獲得了HPV 16 L1蛋白較持續(xù)的表達(dá)。結(jié)論成功實(shí)現(xiàn)了組成型啟動(dòng)子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表達(dá),為HPV疫苗的低成本及方便生產(chǎn)提供了一個(gè)可供選擇的有效方案。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所;云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;云南省重大傳染病疫苗工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 翻譯延伸因子-α 啟動(dòng)子 畢赤酵母 綠色熒光蛋白 人乳頭瘤病毒 L蛋白
【基金】：云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究面上項(xiàng)目(2010ZC232) 中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)(2012N08)
【分類號】：R373.9
【正文快照】： 人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染導(dǎo)致的宮頸癌是危害婦女健康的第二大疾病,全世界范圍內(nèi)每年可致274 000婦女死亡[1]。由于70%~80%的宮頸癌與高危型HPV16和HPV18感染有關(guān),目前的疫苗主要針對這兩個(gè)基因型。HPV不能體外培養(yǎng),國際上已有的疫苗是基因重組HPV主要衣

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余占橋;馬青山;韓冰;張日俊;;細(xì)菌素Bacteriocin E50-52(H)基因設(shè)計(jì)及其畢赤酵母表達(dá)載體構(gòu)建[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年04期

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4 崔艷艷;易國輝;屠發(fā)志;張?zhí)碓?羅進(jìn)賢;張愛聯(lián);;高密度發(fā)酵P.pastoris組成型表達(dá)纖維素二糖水解酶[J];熱帶作物學(xué)報(bào);2010年08期

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10 符策奕;沈錦城;張愛聯(lián);羅進(jìn)賢;張?zhí)碓?;用畢赤酵母組成型分泌表達(dá)Canstatin-N[J];生物技術(shù);2013年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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3 汪小鋒;解脂耶氏酵母脂肪酶LIP2在畢赤酵母中的高效表達(dá)及高密度發(fā)酵工藝研究[D];華中科技大學(xué);2012年

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7 江學(xué)斌;基于工業(yè)化生產(chǎn)的畢赤酵母高效表達(dá)木聚糖酶XYL1的研究[D];華南理工大學(xué);2013年

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9 韓銘海;彈性蛋白酶在畢赤酵母中表達(dá)及N-糖基化位點(diǎn)突變對重組酶的影響[D];江南大學(xué);2013年

10 林小瓊;基于iTRAQ技術(shù)的高效表達(dá)木聚糖酶重組畢赤酵母細(xì)胞的蛋白組學(xué)研究[D];華南理工大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史勇;甜味蛋白Brazzein真核表達(dá)系統(tǒng)的建立[D];吉林大學(xué);2011年

2 袁圍;畢赤酵母翻譯延伸因子1-α啟動(dòng)子在南極假絲酵母脂肪酶B表達(dá)上的應(yīng)用[D];華南理工大學(xué);2011年

3 王曉玉;重組人透明質(zhì)酸酶PH-20在畢赤酵母中的表達(dá)，，發(fā)酵條件優(yōu)化及性質(zhì)研究[D];山東大學(xué);2011年

4 孫永川;Mut~s型重組畢赤酵母表達(dá)解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

5 陳明;易錯(cuò)PCR定向進(jìn)化擴(kuò)展青霉FS1884脂肪酶[D];福建師范大學(xué);2011年

6 陳俊良;重組人載脂蛋白A-Ⅳ基因的克隆及在畢赤酵母中表達(dá)的研究[D];吉林大學(xué);2009年

7 譚明;CTB-LK密碼子多點(diǎn)突變及其優(yōu)化基因在畢赤酵母中的表達(dá)[D];天津大學(xué);2009年

8 張平;畢赤酵母HXT和MIG基因?qū)τ贏OX1啟動(dòng)子的碳源阻遏功能[D];華東理工大學(xué);2010年

9 高宇;鱟素—人溶菌酶畢赤酵母表達(dá)、大規(guī)模發(fā)酵條件優(yōu)化及生物學(xué)活性分析[D];吉林大學(xué);2012年

10 尹慧祥;木糖異構(gòu)酶和木酮糖激酶基因克隆、表達(dá)及活性分析[D];海南大學(xué);2010年

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 丁鐫;宋躍芬;袁野;劉娣;;畢赤酵母表達(dá)外源基因存在的問題與對策[J];畜牧與獸醫(yī);2007年02期

2 鄭桂珍;趙穎;戴夢;劉靜;王富強(qiáng);;酵母綠色熒光蛋白報(bào)告載體的構(gòu)建及其在過氧化物酶體研究中的應(yīng)用[J];微生物學(xué)報(bào);2007年04期

3 汪暢;王英;雷W

本文編號：1012444