本文關(guān)鍵詞：弓形蟲GRA7致密顆粒蛋白與宿主巨噬細胞蛋白的相互作用

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【摘要】：目的鑒定與弓形蟲GRA7致密顆粒蛋白相互作用的宿主巨噬細胞蛋白組分,并研究蛋白相互作用與感染過程的相關(guān)性。方法建立基于人源THP-1單核巨噬細胞系的弓形蟲-巨噬細胞感染模型。以含GST標簽的GRA7全長重組蛋白為誘餌,采用GST沉降體外蛋白相互作用方法 ,捕獲與誘餌相互作用的人THP-1單核巨噬細胞系成分,采用液相色譜-兩級質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)技術(shù)鑒定宿主靶蛋白。采用免疫共沉淀(Co-IP)方法驗證其體內(nèi)的相互作用。采用人碳酸酐酶1(h CA1)抗血清為一抗的蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)驗證捕獲蛋白為宿主h CA1蛋白組分。采用pc DNA3.1(+)真核質(zhì)粒過表達宿主靶蛋白的方法研究蛋白相互作用與弓形蟲感染巨噬細胞的相關(guān)性。結(jié)果 GST沉降實驗捕獲的THP-1細胞蛋白組分主要為相對分子質(zhì)量為Mr29 000的蛋白,質(zhì)譜鑒定為h CA1。Co-IP實驗證明弓形蟲GRA7蛋白與宿主h CA1蛋白在感染過程中具有顯著體內(nèi)相互作用。THP-1巨噬細胞內(nèi)過表達h CA1基因可顯著增強弓形蟲的繁殖速度和納蟲泡形成速度,但不影響最終繁殖數(shù)量。結(jié)論弓形蟲GRA7致密顆粒蛋白與THP-1巨噬細胞的h CA1蛋白具有顯著蛋白相互作用,且該相互作用與弓形蟲在THP-1巨噬細胞內(nèi)的繁殖速度呈正相關(guān)。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院 北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所;北京市熱帶病防治研究重點實驗室;首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院 北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲 致密顆粒蛋白 人碳酸酐酶 蛋白相互作用 納蟲泡
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81071375,81301404) 北京市自然科學(xué)基金(No.7132042,7144196) 北京市優(yōu)秀人才培養(yǎng)資助(No.2013D003034000021) 首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)-臨床科研合作基金(No.13JL16)~~
【分類號】：R382.5
【正文快照】： 弓形蟲病是由剛地弓形蟲感染引起的世界范圍內(nèi)廣泛分布的人獸共患寄生蟲病[1,2]。剛地弓形蟲的致病機制復(fù)雜,其中分泌蛋白與宿主細胞之間的相互作用與感染過程密切相關(guān)[3]。弓形蟲分泌蛋白包括微線體蛋白(microneme protein,MIC)、棒狀體蛋白(rhoptry protein,ROP)和致密顆粒

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