本文關(guān)鍵詞：過(guò)表達(dá)及定點(diǎn)突變縫隙連接蛋白Cx43小鼠黑色素瘤細(xì)胞模型的構(gòu)建

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【摘要】：目的構(gòu)建小鼠黑色素瘤細(xì)胞(B16)過(guò)表達(dá)野生型及點(diǎn)突變型縫隙連接蛋白43(Connexin43,Cx43)細(xì)胞模型,為以縫隙連接(Gap Junction,GJ)為靶點(diǎn)的中藥復(fù)方、中藥單藥及藥物單體的研究提供可靠陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。方法構(gòu)建野生型Cx43、突變型Cx43G21R、突變型Cx43G138R重組熒光蛋白融合慢病毒表達(dá)質(zhì)粒,用定點(diǎn)突變技術(shù)獲得Cx43G21R和Cx43G138R突變體,對(duì)上述3種質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切和測(cè)序鑒定,并分別包裝病毒感染B16細(xì)胞,使B16細(xì)胞過(guò)表達(dá)野生型Cx43、突變型Cx43G21R、突變型Cx43G138R。Western blot檢測(cè)Cx43蛋白表達(dá)水平變化,熒光示蹤法觀(guān)察縫隙連接通訊(Gap Junction Intercellular Communication,GJIC)功能變化。結(jié)果①酶切及測(cè)序證明,成功構(gòu)建pLVCx43-mCherry、pLVCx43-mCherryG21R、pLVCx43-mCherryG138R重組熒光蛋白融合慢病毒表達(dá)質(zhì)粒。②成功感染B16細(xì)胞并篩選穩(wěn)定過(guò)表達(dá)Cx43、Cx43G21R、Cx43G138R細(xì)胞株,Western blot檢測(cè)顯示上述細(xì)胞株Cx43蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組。③過(guò)表達(dá)野生型Cx43后B16細(xì)胞GJIC功能較對(duì)照組增強(qiáng);過(guò)表達(dá)突變型Cx43后B16細(xì)胞GJIC功能較對(duì)照組減弱。結(jié)論過(guò)表達(dá)野生型Cx43可增強(qiáng)B16細(xì)胞GJIC功能,過(guò)表達(dá)突變型Cx43可抑制B16細(xì)胞GJIC功能。
【作者單位】： 廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 黑色素瘤細(xì)胞 小鼠 縫隙連接蛋白 定點(diǎn)突變 慢病毒載體 縫隙連接通訊
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81072906,30973811)
【分類(lèi)號(hào)】：R273;R-332
【正文快照】： 大多數(shù)腫瘤組織中存在縫隙連接蛋白(Connexin,Cx)表達(dá)和功能異常[1-5],這將影響腫瘤自殺基因療法的旁殺傷效應(yīng)。增強(qiáng)縫隙連接通訊(Gap JunctionIntercellular Communication,GJIC)功能是腫瘤自殺基因療法增效的主要機(jī)制之一[6-10],也成為了腫瘤自殺基因療法增效的作用靶點(diǎn)。Cx

【參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1004547