本文關(guān)鍵詞：重組銅綠假單胞菌外毒素A和pcrV基因質(zhì)粒的構(gòu)建及真核表達(dá)

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【摘要】：目的外毒素A(toxA基因編碼)是銅綠假單胞菌毒力最強(qiáng)的因子之一,PcrV(pcrV基因編碼)是銅綠假單胞菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)的關(guān)鍵調(diào)控因子之一。文中旨在構(gòu)建重組toxA和pcrV基因的銅綠假單胞菌核酸疫苗,并在HEK-293細(xì)胞中表達(dá)目的蛋白。方法 PCR法從銅綠假單胞菌基因組基因中擴(kuò)增出toxA和pcrV基因,點(diǎn)突變法對(duì)toxA基因進(jìn)行減毒優(yōu)化,隨后將突變的toxAm基因和pcrV基因分別插入pIRES真核表達(dá)質(zhì)粒的2個(gè)多克隆位點(diǎn),構(gòu)建真核雙表達(dá)重組質(zhì)粒pIRES-toxAm-pcrV。脂質(zhì)體法將pIRES-toxAm-pcrV瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入HEK-293細(xì)胞,通過Western blot檢測toxAm及pcrV在真核細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果構(gòu)建的真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES-toxAm-pcrV,經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞后,在其細(xì)胞內(nèi)檢測到目的蛋白的表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建pIRES-toxAm-pcrV表達(dá)載體并在轉(zhuǎn)染的真核細(xì)胞中得以有效的表達(dá),為研究銅綠假單胞菌預(yù)防性疫苗奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 銅綠假單胞菌 外毒素A 核酸疫苗 pcrV基因
【基金】：江蘇省衛(wèi)生廳面上項(xiàng)目(H200911)
【分類號(hào)】：R378.991
【正文快照】： 0引言銅綠假單胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)是常見的條件致病菌,在各種醫(yī)院感染中居于前位,也是慢性阻塞性肺疾病及氣管擴(kuò)張癥反復(fù)感染者的常見的致病菌。PA對(duì)許多抗生素具有天然或獲得性耐藥性,易出現(xiàn)多重耐藥及泛耐藥菌株,給臨床治療帶來極大困難[1]。隨著對(duì)PA致病機(jī)制

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