本文關(guān)鍵詞：擬胚體的狀態(tài)對小鼠胚胎干細(xì)胞神經(jīng)誘導(dǎo)效率的影響

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【摘要】：小鼠胚胎干細(xì)胞是指由小鼠早期胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離并建系的多能干細(xì)胞。小鼠胚胎干細(xì)胞具有自我更新和多向分化潛能。在體外環(huán)境中,小鼠胚胎干細(xì)胞不僅能自發(fā)分化為外胚層、中胚層以及內(nèi)胚層細(xì)胞,還能在含有特殊細(xì)胞因子和化學(xué)藥物的環(huán)境中定向誘導(dǎo)分化。由于神經(jīng)細(xì)胞具有不可再生性,因此多年來小鼠胚胎干細(xì)胞神經(jīng)誘導(dǎo)一直是研究較熱的一個方向。目前,大多數(shù)小鼠胚胎干細(xì)胞神經(jīng)誘導(dǎo)方法還是基于懸浮法形成EBs的分化系統(tǒng)。然而,小鼠胚胎干細(xì)胞懸浮法形成的EBs具有形成EBs大小隨機(jī)以及形成EBs密度隨機(jī)的缺陷,進(jìn)而影響神經(jīng)誘導(dǎo)的效率,最終使得實驗可重復(fù)性變差。為了盡量縮小小鼠胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)誘導(dǎo)分化的實驗差異,以便于利用該系統(tǒng)做進(jìn)一步的神經(jīng)發(fā)育相關(guān)研究以及藥物篩選,本實驗基于Watanabe和Kondo研發(fā)的神經(jīng)誘導(dǎo)方法,采用懸滴法形成的EBs針對EBs的大小以及EBs的密度對神經(jīng)誘導(dǎo)效率的影響進(jìn)行了研究,并最終確定了神經(jīng)誘導(dǎo)效率較高的EBs直徑和EBs密度,從而優(yōu)化了小鼠胚胎干細(xì)胞神經(jīng)誘導(dǎo)方法。
【關(guān)鍵詞】：小鼠胚胎干細(xì)胞 擬胚體 神經(jīng)誘導(dǎo) 方法優(yōu)化
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-11
• 第一部分 引言11-25
• 一、哺乳動物早期胚胎神經(jīng)發(fā)育簡介11-12
• 二、胚胎干細(xì)胞體外分化為神經(jīng)細(xì)胞12-23
• 1、小鼠ESCs自發(fā)分化為神經(jīng)細(xì)胞13-15
• 2、化合物誘導(dǎo)ESCs分化為神經(jīng)細(xì)胞15-16
• 3、ESCs分化細(xì)胞的篩選16-19
• 3.1、使用選擇性生長培養(yǎng)基富集神經(jīng)前體細(xì)胞17
• 3.2、運用基因工程技術(shù)富集神經(jīng)前體細(xì)胞17-19
• 4、利用神經(jīng)調(diào)節(jié)基因誘導(dǎo)ESCs向神經(jīng)方向分化19-20
• 5、使用誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)ESCs分化為神經(jīng)細(xì)胞20-23
• 5.1、源自基質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)分化誘導(dǎo)因子20-22
• 5.2、源自星形膠質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)分化誘導(dǎo)因子22
• 5.3、源自肝癌細(xì)胞系HepG2的神經(jīng)分化誘導(dǎo)因子22-23
• 三、總結(jié)23-25
• 第二部分 實驗部分25-53
• 一、實驗材料25-26
• 1、實驗動物25
• 2、細(xì)胞系25
• 3、實驗試劑25-26
• 4、實驗耗材26
• 5、實驗儀器26
• 二、實驗方法26-35
• 1、制備小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEFs）26-27
• 2、制備飼養(yǎng)層細(xì)胞27
• 3、R1細(xì)胞系的培養(yǎng)27-29
• 4、R1細(xì)胞系神經(jīng)誘導(dǎo)29-32
• 4.1、懸浮法神經(jīng)誘導(dǎo)29-30
• 4.2、懸滴法神經(jīng)誘導(dǎo)30-31
• 4.3、單層細(xì)胞神經(jīng)誘導(dǎo)31-32
• 5、免疫熒光實驗32
• 6、抽提RNA并制備cDNA32-33
• 7、RT-PCR33-34
• 8、QPCR34-35
• 9、統(tǒng)計分析35
• 三、實驗結(jié)果35-51
• 1、R1細(xì)胞系的培養(yǎng)與全能性鑒定35-37
• 1.1、R1細(xì)胞的培養(yǎng)35-36
• 1.2、R1細(xì)胞的多能性鑒定36-37
• 2、R1細(xì)胞神經(jīng)誘導(dǎo)分化37-51
• 2.1、EBs直徑的大小對于神經(jīng)誘導(dǎo)效率的影響37-44
• 2.2、EBs的密度對于神經(jīng)誘導(dǎo)效率的影響44-51
• 四、實驗結(jié)論及討論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-60
• 致謝60

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本文編號：992016