發(fā)布時(shí)間：2017-10-06 19:24

  本文關(guān)鍵詞：HSPA12B在抑制LPS所致內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的必要性研究

  更多相關(guān)文章： HSPA12B 內(nèi)毒素 HUVEC 炎癥反應(yīng)

【摘要】：背景和目的:熱休克蛋白是一類基因序列高度保守的蛋白質(zhì),它對于細(xì)胞的氧化應(yīng)激和凋亡都具有保護(hù)作用。熱休克蛋白A12B(Heat shock protein A12B,HSPA12B)是新近發(fā)現(xiàn)的HSP70家族的新成員,主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞。前期研究中我們發(fā)現(xiàn),高表達(dá)HSPA12B可顯著改善細(xì)菌內(nèi)毒素(lipopolysaccharide,LPS)所致的心功能損害,其機(jī)制可能與抑制心肌細(xì)胞的炎癥反應(yīng)有關(guān)。本研究旨在探討HSPA12B對LPS所致人血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響。方法:1.western blot方法檢測LPS刺激HUVEC不同時(shí)間點(diǎn)HSPA12B的表達(dá)量2.si RNA敲降HUVEC中HSPA12B的表達(dá)(1)通過RT-PCR在m RNA水平驗(yàn)證HSPA12B敲降效率(2)通過western blot在蛋白水平驗(yàn)證HSPA12B敲降效率3.檢測HUVEC在LPS刺激后的炎癥反應(yīng)(1)RT-PCR技術(shù)檢測TNF-α、IL-6、VCAM-1及ICAM-1的表達(dá)量(2)ELISA方法檢測TNF-α和IL-6從細(xì)胞的釋放情況(3)黏附反應(yīng)觀察LPS對“PMN-HUVEC”黏附的影響4.檢測HSPA12B敲降對LPS誘導(dǎo)的HUVEC炎癥反應(yīng)的影響(1)RT-PCR技術(shù)檢測低表達(dá)HSPA12B的HUVEC中TNF-α、IL-6、VCAM-1及ICAM-1的表達(dá)量(2)黏附反應(yīng)觀察低表達(dá)HSPA12B的HUVEC細(xì)胞模型中HUVEC對PMN黏附率的變化結(jié)果:1.LPS刺激后HSPA12B表達(dá)呈現(xiàn)快速上升趨勢2.si RNA轉(zhuǎn)染使HUVEC中HSPA12B的m RNA水平和蛋白水平顯著降低,提示HSPA12B敲降(knockdown)的HUVEC細(xì)胞模型構(gòu)建成功。3.LPS刺激后,HUVEC中TNF-α、IL-6、VCAM-1及ICAM-1的m RNA水平較對照組均顯著增加,培養(yǎng)上清中TNF-α和IL-6的釋放量較對照組顯著增加,HUVEC-PMN黏附率較對照組顯著增加,提示HUVEC中炎癥反應(yīng)在LPS刺激后被顯著激活。4.HSPA12B敲降后,進(jìn)一步升高LPS所誘導(dǎo)的TNF-α、IL-6、VCAM-1及ICAM-1在m RNA水平、以及PMN-HUVEC的黏附。結(jié)論:本研究表明,HSPA12B是抑制LPS所致炎癥反應(yīng)所必須的。
【關(guān)鍵詞】：HSPA12B 內(nèi)毒素 HUVEC 炎癥反應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R364.5
【目錄】：

• 英文縮寫和略語5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 參考文獻(xiàn)11-13
• 第一部分 LPS對HUVEC中HSPA12B表達(dá)的影響13-22
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-20
• 討論20-21
• 參考文獻(xiàn)21-22
• 第二部分 LPS可誘導(dǎo)HUVEC發(fā)生炎癥反應(yīng)22-31
• 材料和方法22-27
• 結(jié)果27-29
• 討論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-31
• 第三部分 siRNA敲降HUVEC中HSPA12B表達(dá)31-43
• 材料與方法31-39
• 結(jié)果39-40
• 討論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 第四部分 HSPA12B敲降加重LPS所致的HUVEC炎癥 反應(yīng)43-48
• 材料和方法43-44
• 結(jié)果44-45
• 討論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 綜述48-58
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況58-59
• 致謝59

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