本文關(guān)鍵詞：抗PD-L1單抗的研制及其對乙型肝炎病毒的抑制效果初步研究

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【摘要】：目的:獲得具有阻斷PD-1/PD-L1結(jié)合活性的Anti-PD-L1單克隆抗體,并在體內(nèi)和體外模型中初步探索其應(yīng)用于慢性HBV感染治療的潛力。方法:利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)和離子交換柱層析純化手段,表達(dá)純化獲得具有體外結(jié)合活性的人源和鼠源的PD-1/PD-L1蛋白,采用純化后的人PD-L1蛋白作為免疫原免疫BALB/c小鼠,制備小鼠抗人PD-L1的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株,基于間接化學(xué)發(fā)光免疫法評估了這些抗體與人源和鼠源重組蛋白的結(jié)合活性,并定量評估它們對PD-L1體外相互作用的阻斷活性。利用慢乙肝病人PBMC體外刺激方法評估其對T細(xì)胞功能的促進(jìn)作用,在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠中評估其抑制HBV的效果。結(jié)果:本研究獲得了8株穩(wěn)定分泌Anti-PD-L1的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株,其中Anti-PD-L1Ab5和Ab6兩株單抗與人和小鼠的PD-L1具有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)性,且均可阻斷人和小鼠的PD-1/PD-L1結(jié)合活性。在慢乙肝病人PBMC刺激培養(yǎng)實驗中,Ab5和Ab6可促進(jìn)γ干擾素水平升高;在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠中單劑注射Ab6,48 h后血清HBV DNA水平降低20倍,血清HBs Ag水平降低至基線水平的30%。結(jié)論:獲得了2株具有阻斷人和小鼠PD-1/PD-L1結(jié)合活性的單克隆抗體,其在PBMC體外刺激培養(yǎng)系統(tǒng)中可促進(jìn)慢乙肝病人的T細(xì)胞功能,在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠中具有顯著的抗病毒效果,具備一定的治療應(yīng)用潛力。
【作者單位】： 廈門大學(xué)分子疫苗學(xué)與分子診斷學(xué)國家重點實驗室國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術(shù)研究中心公共衛(wèi)生學(xué)院;廈門大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;廈門萬泰凱瑞生物技術(shù)有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 程序性細(xì)胞死亡蛋白配體 治療性單克隆抗體 乙型肝炎病毒 免疫治療
【基金】：國家級科技重大專項(No.2013ZX10002002-001)
【分類號】：R373.21
【正文快照】： 1本文為國家級科技重大專項(No.2013ZX10002002-001)。2廈門大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,廈門361102。3廈門萬泰凱瑞生物技術(shù)有限公司,廈門361000。乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染會導(dǎo)致急性或慢性的肝臟炎癥,其中慢性肝炎可能會進(jìn)一步進(jìn)展為肝硬化或肝癌,目前全球仍有超過2.4

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