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SapM誘導(dǎo)的自噬體-溶酶體融合阻斷依賴于SapM和Rab7的相互作用

發(fā)布時(shí)間:2017-09-30 11:35

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【摘要】:目的研究Rab7在結(jié)核分枝桿菌毒力因子分泌性酸性磷酸酶(SapM)誘導(dǎo)的自噬體-溶酶體融合阻斷中的作用。方法采用Rab7小干擾RNA(si Rab7)轉(zhuǎn)染Raw264.7細(xì)胞,Western blot法檢測P62蛋白水平。m Cherry-SapM轉(zhuǎn)染Raw264.7細(xì)胞后免疫熒光檢測SapM與Rab7共定位情況,免疫共沉淀分析SapM與Rab7的關(guān)系。用3種SapM的突變體SapM△ARCA,SapM△FRED和SapM△CT轉(zhuǎn)染Raw264.7細(xì)胞,分析SapM的不同突變體與Rab7的關(guān)系。結(jié)果 si Rab7處理后,細(xì)胞P62水平顯著增高;免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示SapM與Rab7在胞內(nèi)共定位;免疫共沉淀分析顯示SapM與Rab7可相互沉淀;3種不同突變形式的SapM中,只有SapM△CT不能與Rab7相互作用。結(jié)論 SapM誘導(dǎo)的自噬體-溶酶體融合阻斷依賴于SapM與Rab7的相互作用。
【作者單位】: 安徽理工大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心;安徽理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)免疫學(xué)與檢驗(yàn)教研室;安徽理工大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】分泌性酸性磷酸酶(SapM) 自噬 Rab 融合
【基金】:國家自然科學(xué)基金(81302524,81202294,81571528) 安徽省科技攻關(guān)項(xiàng)目(1604a0802091)
【分類號(hào)】:R378.911
【正文快照】: 自噬是真核細(xì)胞的一種保護(hù)機(jī)制,具有處理細(xì)胞內(nèi)難以降解的細(xì)胞器、蛋白質(zhì)聚集物和微生物的功能[1]。自噬過程大致分為兩個(gè)階段[1-2]:第一階段的主要事件是自噬體形成,其調(diào)控分子和信號(hào)通路已較為明確;第二階段自噬體需要與溶酶體融合以降解其內(nèi)容物。自噬體與溶酶體的融合在消

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本文編號(hào):948012

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