本文關(guān)鍵詞：重組人白細(xì)胞介素-13在大腸桿菌中的表達(dá)純化及鑒定

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【摘要】：采用大腸桿菌(Escherichia coli)作為宿主,通過(guò)300L發(fā)酵罐進(jìn)行中試發(fā)酵表達(dá)重組人白細(xì)胞介素-13(rhIL-13)融合蛋白;經(jīng)異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo),離心發(fā)酵液收集菌體,菌體經(jīng)溶解、變性、稀釋復(fù)性及親和層析捕獲,獲得融合蛋白;融合蛋白經(jīng)腸激酶酶切后,再經(jīng)親和層析分離和分子篩精細(xì)純化等步驟,獲得高純度rhIL-13原液.每升發(fā)酵液可獲得高純度的rhIL-13原液約30mg.通過(guò)本純化工藝獲得的rhIL-13原液經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)法檢測(cè),純度大于98.75%;經(jīng)高效液相色譜分子排阻(HPLC-SEC)法檢測(cè),純度為100%;質(zhì)譜(MS)法測(cè)定rhIL-13分子質(zhì)量為12 348u,與理論值基本一致;采用噻唑藍(lán)(MTT)法進(jìn)行比活性檢測(cè),比活大于8.0×106 IU/mg;采用HPLC-SEC法和MS法對(duì)rhIL-13二硫鍵數(shù)目和位置進(jìn)行分析,結(jié)果顯示二硫鍵數(shù)目和位置與理論一致.此操作方法可獲得高純度、高活性的rhIL-13原液,并且操作簡(jiǎn)單,易于放大,可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn).
【作者單位】： 廈門(mén)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;廈門(mén)特寶生物工程股份有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 重組人白細(xì)胞介素-(rhIL-) 表達(dá) 純化 鑒定
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863)項(xiàng)目(2007AA021604)
【分類(lèi)號(hào)】：R378.2
【正文快照】： 白細(xì)胞介素-13(IL-13)是一種多功能細(xì)胞因子,主要由T細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞、漿細(xì)胞及樹(shù)突狀細(xì)胞等,尤其是Ⅱ型輔助性T細(xì)胞(Th2)在活化狀態(tài)下分泌產(chǎn)生[1].IL-13的主要功能包括:誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化,增強(qiáng)主要組織相容性復(fù)合體(MHC)Ⅱ類(lèi)分子的表達(dá)[2];抑制脂多糖誘導(dǎo)的單核因子分泌,控制，

本文編號(hào)：941735